Enzymes, NGS, Black male pipetting in front of computer screen in a laboratory environment
Enzymes pour la biologie moléculaire

Analyse d’ARN

Tout pour l’ARN : amplifier, séquencer, lier, marquer

Il y a tout un ensemble d’enzymes permettant de manipuler l’ARN pour l’analyse en aval de l’expression génique. Les transcriptases inverses génèrent un ADN complémentaire (ADNc) d’après une transcription. L’ADNc peut être marqué ou amplifié à des fins de clonage ou d’études quantitatives. Les ARN ligases relient les bases, les marqueurs et les adaptateurs, les ARN polymérases ajoutent les ribonucléotides et les ribonucléases les éliminent. 

Détectez et manipulez l’ARN par amplification

Les transcriptases inverses sont des enzymes capables de polymériser un brin d’ADN (ADNc) qui est complémentaire d’un ARN matriciel d’origine. L’ARN est susceptible d’être dégradé par les RNases, le recours à une enzyme transcriptase inverse pour produire un ADNc permet d’éviter de manipuler l’ARNm. L’ADNc devient une matrice stable dans de nombreuses applications en aval destinées à l’étude de l’ARN, notamment l’analyse de l’expression génique. Vous pouvez utiliser la PCR classique, la qPCR, la RT-qPCR en une étape ou des méthodes isothermes pour l’amplification de l’ADNc matriciel. L’amplification peut être suivie d’un clonage avec des protocoles d’enzyme classiques ou d’un clonage indépendant de la ligature utilisant l’activité de l’exonucléase 3’→5’ de l’ADN polymérase T4. 

Toutes les enzymes transcriptases inverses (ADN polymérases ARN-dépendantes) peuvent être utilisées pour :

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Transcriptases inverses

Choisissez une enzyme ou un kit de transcriptase inverse correspondant aux exigences de votre ARN matriciel ou de votre application.

ARN polymérases et ligases

Les ARN polymérases, ou plus spécifiquement les ARN polymérases ADN-dépendantes, sont des enzymes qui synthétisent l’ARN à partir d’un ADN matriciel. L’enzyme polymérase, poly(A), utilise l’ARN simple brin comme amorce pour ajouter une queue poly(A) à l’ARN en catalysant l’intégration de résidus d’adénine aux terminaisons 3’ de l’ARN. 

Les ARN ligases T4 sont des enzymes utiles pour analyser l’ARN, notamment en amont de procédures telles que le séquençage d’ARN à haut débit et les puces à ADN. Les ARN ligases T4 1 et 2 sont des enzymes capables de marquer, circulariser ou réaliser une ligature intermoléculaire de l’ARN en liant les polynucléotides adjacents 3'-OH et 5'-PO4. La fixation des adaptateurs aux extrémités 3' de l’ARN avec l’ARN ligase T4 1 est une première étape utile pour la quantification de l’ARN et la découverte par RT-PCR et séquençage à haut débit.

La manipulation de l’ARN est facilitée par ces polymérases et ligases.

Digestion et protection de l’ARN

Le dosage de protection de la ribonucléase (RPA) avec l’enzyme RNase A est une technique qui permet de déterminer le nombre relatif ou absolu de transcriptions et de cartographier les terminaisons d’ARNm ainsi que les limites intron/exon.

Les substitutions d’une base peuvent être détectées et localisées par une méthode enzymatique simple qui implique le clivage RNase A des mésappariements d’une base dans des hétéroduplex ARN:ADN.

Réalisez la digestion de l’ARN avec l’une de ces endoribonucléases spécifiques. Protégez votre ARN avec l’un de nos inhibiteurs de RNase.
* À de faibles concentrations de sel (0 à 100 mM de NaCl), la RNase A clive l’ARN simple brin et double brin ainsi que le brin d’ARN dans les hybrides ARN:ADN. À des concentrations de NaCl de l’ordre de 0,3 M ou plus, la RNase A clive spécifiquement l’ARN simple brin.

Découvrez les enzymes utilisées pour l’analyse de l’ARN

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FAQ sur l’analyse d’ARN

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