digital PCR, dPCR, Nanoplate principle
PCR digital

La novedad absoluta en PCR – PCR digital

Descubrimientos: PCR digital (dPCR)

El poder de la PCR digital: encontrar «la aguja en el pajar»

La PCR digital (dPCR) es una técnica en la que la muestra se divide en muchas reacciones individuales, de tal modo que en cada reacción estén presentes cero, una o más moléculas diana. Gracias a este enfoque es sorprendentemente fácil detectar un solo positivo en un fondo muy potente de negativos, el típico problema de encontrar «la aguja en el pajar». En estos casos, debido a la existencia de un límite de detección más bajo, quedan excluidas las real-time PCR estándar cuantitativas (qPCR) como posible método.

La característica definitoria de la PCR digital es la cuantificación absoluta de los ácidos nucleicos. Después de la partición, las reacciones se someten a termociclado de PCR convencional y las particiones se analizan para determinar la presencia (reacción positiva) o ausencia (reacción negativa) de una señal de fluorescencia. Atendiendo a esta información, se puede calcular el número absoluto de moléculas presentes en la muestra. A diferencia de la qPCR, la dPCR no se basa en curvas estándar. Por ello, la dPCR tiene un límite de detección más bajo y una precisión mayor que la qPCR.

Los investigadores utilizan cada vez más la PCR digital para aplicaciones sensibles, como el análisis de variación del número de copias, la cuantificación de la expresión génica y la detección de dianas poco frecuentes. El método ha ayudado a avanzar en la investigación de terapias celulares y genéticas, la investigación del cáncer, la vigilancia de enfermedades infecciosas, las pruebas de alimentos, etc.

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Referencias

Huggett JF et al. (2013). The digital MIQE guidelines: Minimum Information for Publication of Quantitative Digital PCR Experiments. Clin Chem. 59(6):892-902.

dMIQE Group, Huggett JF. (2020). The Digital MIQE Guidelines Update: Minimum Information for Publication of Quantitative Digital PCR Experiments for 2020. Clin Chem. 66(8):1012-1029.