QuantiTect PCR Kits

• Détection très sensible de cibles à faible nombre de copies
• qPCR à l’aide de sondes spécifiques de la séquence ou de SYBR Green
• Quantification précise sur plusieurs logs de matrice
• Pas besoin d’optimiser les conditions de réaction et de thermocyclage
• Détection d’un maximum de 5 cibles dans le même tube

Les QuantiTect PCR Kits (qPCR kits) permettent une quantification sensible des cibles ADNg et ADNc par PCR en temps réel et RT-PCR en deux étapes à l’aide de sondes spécifiques de la séquence ou la détection SYBR Green I. Les kits de real-time PCR permettent également de quantifier de manière fiable jusqu’à 5 cibles d’ADNg ou d’ADNc dans un seul tube par real-time PCR ou RT-PCR multiplex en deux étapes. La combinaison d’un hot start et d’un système de tampon PCR unique dans le mélange principal prêt à l’emploi garantit une qPCR très sensible sur n’importe quel thermocycleur en temps réel, sans besoin d’optimisation. Le mélange de dNTP comprend du dUTP ce qui permet un traitement optionnel à l’UNG. Pour des raisons de commodité, les mélanges maîtres des QuantiTect PCR Kits peuvent être conservés entre 2 et 8 °C.

Deux formats de kits sont disponibles pour la PCR multiplex utilisant des sondes spécifiques à une séquence : le QuantiTect Multiplex PCR kit pour les thermocycleurs qui nécessitent le colorant ROX pour la normalisation de la fluorescence, et le QuantiTect Multiplex PCR NoROX kit pour tous les autres thermocycleurs.

La HotStarTaq DNA Polymerase incluse dans les kits de PCR quantitative QuantiTect augmente la spécificité de la réaction PCR en fournissant le hot start le plus strict par rapport aux autres polymérases.

Les QuantiTect SYBR Green PCR Kits permettent une quantification spécifique sur une large plage linéaire (voir figure «  Quantification spécifique sur une large plage linéaire »). Les QuantiTect SYBR Green PCR Kits fournissent des résultats sensibles et fiables lorsqu’ils sont utilisés en combinaison avec le QuantiTect Reverse Transcription Kit et les QuantiTect Primer Assays (voir figure «  Quantification spécifique et sensible »).

Les QuantiTect Probe PCR Kits fournissent des résultats sensibles et fiables en combinaison avec le QuantiTect Reverse Transcription Kit (voir figure «  Une sensibilité et une efficacité élevées, ainsi qu’une large plage dynamique »). La composition unique du tampon PCR permet aux QuantiTect Probe PCR Kits de fournir une quantification sensible des cibles d’ADN à faible taux de copie, ainsi qu’une quantification précise sur une large plage linéaire (voir la figure «  Large plage dynamique dans la real-time PCR »).

Le QuantiTect Multiplex PCR Master Mix garantit que les produits PCR dans une réaction multiplex sont amplifiés avec la même efficacité et la même sensibilité que les produits PCR dans les réactions d’amplification simple correspondantes (voir le tableau « Valeurs de cycle seuil [C_Τ] comparables avec les PCR triplex et singleplex », et la figure «  Résultats comparables avec les PCR 4-plex et singleplex »).

Les kits permettent de détecter jusqu’à 10 copies d’un gène cible, même si le nombre de copies du gène de référence dans la même réaction est jusqu’à 10⁶ fois supérieur (voir la figure «  Détection de 10 copies du gène cible avec un excès de gène de référence. » et le tableau correspondant « Succès de la qPCR quantitative triplex de cibles peu abondantes et très abondantes »).

Les QuantiTect SYBR Green PCR Kits contiennent un mélange principal optimisé et prêt à l’emploi pour la quantification en temps réel hautement spécifique et sensible des cibles ADNc à l’aide du SYBR Green I (voir tableau « Composants de 2x QuantiTect SYBR Green PCR Kit »). Le fluorescent dye SYBR Green I contenu dans le master mix permet d’analyser de nombreuses cibles différentes sans avoir à synthétiser des sondes marquées spécifiques à la cible. Une combinaison équilibrée d’ions K⁺ et NH₄⁺ dans le tampon PCR favorise une renaturation spécifique des amorces et permet une spécificité et une sensibilité élevées de la PCR (voir figure « Renaturation spécifique des amorces »). De plus, la HotStarTaq DNA Polymerase assure un hot start rigoureux, empêchant la formation de produits non spécifiques.

Les QuantiTect Probe PCR Kits contiennent un mélange principal optimisé et prêt à l’emploi pour la quantification en temps réel hautement spécifique et sensible des cibles ADNg et ADNc à l’aide de sondes spécifiques de la séquence (voir tableau « Composants de 2x QuantiTect Probe PCR Kit »). Les kits sont conçus pour être utilisés avec tous les types de sondes spécifiques à une séquence, y compris la détection des sondes d’hydrolyse (par exemple, TaqMan® et autres sondes à double marquage), les sondes FRET et les balises moléculaires. Les QuantiTect Probe PCR Kits contiennent un tampon PCR unique qui renferme une combinaison équilibrée d’ions K⁺ et NH₄⁺. Ces derniers favorisent la renaturation spécifique des amorces, ce qui permet une spécificité et une sensibilité élevées de la PCR (voir la figure « Renaturation spécifique des amorces »). De plus, la HotStarTaq DNA Polymerase assure un hot start rigoureux, empêchant la formation de produits non spécifiques.

Les QuantiTect Multiplex PCR Kits permettent de réussir une RT-PCR multiplex en deux étapes dès la première tentative (voir l’organigramme «  Kits multiplex QIAGEN »). Le mélange principal optimisé garantit que les produits PCR dans une réaction multiplex sont amplifiés avec la même efficacité et la même sensibilité que les produits PCR dans des réactions d’amplification simples correspondantes. Le kit permet de détecter jusqu’à 10 copies d’un gène cible.

L’amplification des gènes de référence et des gènes cibles dans la même réaction plutôt que dans des réactions séparées augmente la fiabilité de la quantification des gènes en minimisant les erreurs de manipulation. LeQuantiTect Multiplex PCR Master Mix contient une combinaison équilibrée d’ions K⁺ et NH₄⁺ ainsi que le Factor MP synthétique unique qui, ensemble, favorisent une renaturation stable et efficace des amorces et des sondes à la matrice d’acide nucléique, ce qui permet une grande efficacité de la PCR (voir le tableau « Composants du 2x QuantiTect Multiplex PCR Kit »). De plus, la HotStarTaq DNA Polymerase assure un hot start rigoureux, empêchant la formation de produits non spécifiques.

Les mélanges principaux des QuantiTect PCR Kits contiennent également du dUTP, ce qui permet un prétraitement avec l’uracil-N-glycosylase (UNG) avant de commencer la PCR, ce qui garantit que tout produit PCR contaminant n’affecte pas les réactions PCR ultérieures.

Si nécessaire, il est possible de prétraiter les réactions avec de l’uracile-N-glycosylase (UNG) afin d’éliminer le transfert des produits de PCR des réactions précédentes. Pour des résultats optimaux lors de la RT-PCR en temps réel en deux étapes, nous recommandons de synthétiser l’ADNc à l’aide du QuantiTect Reverse Transcription Kit. Le kit permet une synthèse rapide de l’ADNc en seulement 20 minutes avec élimination intégrée de la contamination par l’ADN génomique.

Le QuantiTect SYBR Green et lS Probe PCR Kits permettent de s’affranchir de l’optimisation des conditions de réaction, qui peut s’avérer fastidieuse et chronophage. Il suffit d’ajouter les amorces et la matrice d’ADN au mélange principal PCR prêt à l’emploi et de lancer la réaction. Suivez le protocole du manuel pour obtenir des résultats rapides et fiables sur n’importe quel thermocycleur en temps réel.

La combinaison des QuantiTect SYBR Green PCR Kits et des QuantiTect Primer Assays garantit des résultats hautement spécifiques dans l’analyse de l’expression des gènes. Il s’agit d’ensembles d’amorces validés sur le plan bioinformatique et couvrant l’ensemble du génome, qui permettent de détecter des transcriptions chez l’homme, la souris, le rat et de nombreuses autres espèces. Vous pouvez facilement commander les dosages d’amorces QuantiTect en ligne sur le site de GeneGlobe.

Les QuantiTect Multiplex PCR Kits contiennent des mélanges maîtres prêts à l’emploi qui éliminent le besoin d’optimiser les conditions de réaction et de thermocyclage. Le manuel contient un protocole unique que vous pouvez utiliser avec tous les thermocycleurs disponibles, ainsi qu’une liste des colorants recommandés.

Les kits sont disponibles avec ou sans colorant de référence passif ROX dans le mélange principal, ce qui permet de les utiliser sur pratiquement tous les thermocycleurs en temps réel (voir le tableau « Choix du QuantiTect Multiplex PCR Kit approprié »). L’analyse automatique des données permet de détecter même les faibles nombres de copies grâce aux concentrations optimisées de ROX.

Les QuantiTect PCR Kits permettent l’analyse de l’expression génétique de l’ADNc ou la quantification de l’ADNg sur n’importe quel thermocycleur en temps réel. Il s’agit notamment des appareils d’Applied Biosystems, de Bio-Rad, de Cepheid, d’Eppendorf, de Roche et d’Agilent. Pour le Rotor‑Gene Q et les autres thermocycleurs Rotor-Gene, nous recommandons d’utiliser le Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit, le Rotor-Gene Probe PCR Kit ou le Rotor-Gene Multiplex PCR Kit, qui ont été spécialement développés pour le thermocyclage rapide sur ces appareils.