QuantiFast Pathogen +IC Kit

• 同时检测病原体靶标和内质控
• 5x 浓度预混液，用于通过提高样品的投入量而提高灵敏度
• 正确解读阴性结果，提高过程安全性
• 明确地检测微弱的阳性靶标信号
• 标准和快速定量 PCR 仪上的快速通用方案

QuantiFast Pathogen +IC Kit 设计用于使用序列特异性探针对病原体核酸进行灵敏而又快速的 Real-time PCR 或一步法 RT-PCR 检测。为了能够通过正确解读阴性检测结果实现高过程安全性，每个试剂盒都包含用于多重实时检测多达 4 种目标病原体靶标（例如病毒、细菌、真菌等）的试剂以及内质控 (Internal Control, IC)。有两种试剂盒形式可供选择：用于检测病毒 RNA 的 QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit，其中包括 RNA 内质控模板，以及内质控引物/探针组合；或用于检测病毒、细菌或真菌 DNA 的 QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit，其中包含 DNA 内质控模板，以及内质控引物/探针组合。在这两种试剂盒中，都提供有 2 管具有不同浓度的 ROX，使得可以在几乎任何实时定量 PCR 仪器上使用。为方便起见，预混液可存放在 2-8°C 环境下。

QuantiFast Pathogen +IC Kit 可在宽线性范围内同时检测病毒 RNA 或 DNA 靶标及所提供的内质控，且在多重检测时不会降低灵敏度（请参阅图 在 Rotor-Gene Q 上进行的诺如病毒和 单重和双重检测具有高线性度和精度）。该方案的开发宗旨是在大多数定量 PCR 仪上进行快速、可靠性高的循环反应实验（请参阅图“ 在 Rotor-Gene Q 上灵敏检测 BHV-1”和“ 在 ABI 7500 上灵敏检测 BHV-1”）。使用 QuantiFast Pathogen +IC Kit 对病原体靶标和内质控同时进行扩增，可确保正确解读阴性结果，从而提高病原体检测工作流程的安全性（请参阅图“ 阴性结果的正确解读”）。

试剂盒附带的 QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer 可在稀释和反应设置过程中稳定 RNA 和 DNA 标准品，并防止反应管或移液器吸头等塑料表面的核酸残留。它能可靠地稀释用于病毒核酸定量的标准品，从而提供从低到高 C_T 值的宽线性范围。缓冲液可确保标准品长期保存而不发生降解（请参阅图“ 可靠的 RNA 标准品稀释和保存”）。

为了能够通过正确解读阴性检测结果实现高过程安全性，每个 QuantiTect Pathogen _IC Kit 都包含用于多重实时检测用户目标病原体靶标的试剂以及内质控。在同一而非独立反应中扩增对照品和靶标基因可尽量减少操作错误，从而提高基因定量的可靠性。

QuantiFast Pathogen +IC Kit 可在首次尝试时便能成功对病原体核酸进行灵敏、快速的实时多重 PCR 或一步法 RT-PCR 检测（请参阅流程图“ QIAGEN 多重试剂盒”）。经优化的预混液可确保多重反应中 PCR 产物的扩增效率和灵敏度与相应单重扩增反应中的 PCR 产物相同。专门开发的快速 PCR 缓冲液含有新型添加剂 Q-Bond，可显著缩短变性、退火和延伸时间（请参阅图“ 快速引物退火”）。K⁺ 和 NH₄⁺ 离子的均衡组合以及独特的 Synthetic Factor MP 能促进引物和探针稳定且高效地退火到核酸模板，从而提高 PCR 的效率（请参阅图“ 独特的 PCR 缓冲液”）。此外，Sensiscript Reverse Transcriptase 的独特配方可确保病毒 RNA 的高灵敏度逆转录，而 HotStarTaq Plus DNA Polymerase 可提供严格的热启动，防止形成非特异性产物。

QuantiFast Pathogen +IC Kit 提供了一种检测用户目标病原体和内质控的简单程序。它们含有即用型预混液，用于实时检测病毒 RNA（1 步法 RT-PCR）或病毒、细菌和真菌 DNA (PCR)。无需优化反应和循环反应条件。只需将提供的预混液与病原体检测（引物和探针）以及提供的 Internal Control Assay 和 Internal Control DNA 或 RNA 混合。或者，如果在样本纯化过程中已经加入了内质控，则在反应混合物中加入无 RNase 水来替代 Internal Control DNA 或 RNA。然后加入样品 DNA 或 RNA，并在任意定量 PCR 仪上启动反应。试剂盒手册中包含在各种定量 PCR 仪上与 TaqMan® 探针一起使用的经优化方案。其中还包含染料组合的选择建议。

每个 QuantiFast Pathogen +IC Kit 都包含 Internal Control Assay 和 Internal Control DNA 或 RNA，可直接加入反应混合物中作为扩增对照品使用。或者，也可将 IC 添加到纯化程序中，以对纯化过程和扩增进行质控。如需在纯化过程中添加内质控，可单独订购高浓度 Internal Control DNA 或 RNA (High conc.)（请参阅图“ QIAGEN Internal Control”）。

QuantiFast Pathogen +IC Kit 使用序列特异性探针进行灵敏的 Real-time PCR 或一步法 RT-PCR，用于检测包含了内质控的病原体 DNA 、RNA。这些试剂盒可用于多种实时定量 PCR 仪，包括 QIAGEN、Applied Biosystems、Bio-Rad、Roche（毛细管循环仪除外）和 Agilent 的定量 PCR 仪。