QIAexpress Type IV Kit
用于 N-末端 His 标签蛋白的高水平表达和一步法纯化
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QIAexpress Type IV Kit
目录编号 / ID. 32149
各 5 µg：pQE-30、pQE-31、pQE-32（N-末端 6xHis）；10 ml Ni-NTA 琼脂糖
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QIAexpress Type IV Kit 旨在用于分子生物学应用。该产品不能用于疾病诊断、预防和治疗。
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特点
- 覆盖所有三个阅读框的载体
- 用于 His 标签蛋白表达和纯化的完整试剂盒
- N-末端 His 标签蛋白的高水平表达
- 用于一步法纯化和灵敏性检测的通用型、完整系统
产品详情
QIAexpress System 提供了用于 His 标签蛋白表达、纯化和检测的材料。
绩效
QIAexpress Type IV Kit 提供高达总细胞蛋白 50% 的高效表达。
原理
QIAexpress pQE 载体将强效的噬菌体 T5 启动子（可被 E. coli RNA 聚合酶识别）与双 lac 操作子抑制模块相结合，以在 E. coli 中提供严格调控的高水平重组蛋白表达。在存在高水平 lac 阻遏物的情况下，蛋白质合成被有效阻断，并且细胞毒性构建体的稳定性得以增强。pQE 载体（参见图片 pQE 载体和表格）能够将 His 标签置入重组蛋白的 N-末端或 C-末端。
| 元件 | 说明 |
|---|---|
| 1.优化的启动子/操作子元件 | 由噬菌体 T5 启动子和两个 lac 操作子序列组成，这增加了 lac 阻遏物结合的可能性，并确保强效 T5 启动子的有效抑制 |
| 2.合成核糖体结合位点 RBSII | 用于高效翻译 |
| 3.His 标签编码序列 | 5' 或 3' 到多位点人工接头克隆区 |
| 4.翻译终止密码子 | 在所有阅读框架中，用于方便地制备表达构建体 |
| 5.两个强转录终止子 | t0 来自噬菌体 λ，T1 来自 E. coli 的 rrnB 操纵子，以阻止连读转录并确保表达构建体的稳定性 |
| 6.ColE1 复制起点 | 来自 pBR322 |
| 7. β-内酰胺酶基因 (bla) | 赋予氨苄青霉素耐药性 |
查看图表
程序
将编码目标蛋白质的插入片段克隆到合适的构建体中，并转化至合适的 E. coli 菌株中进行表达。通过添加 IPTG 来诱导表达。QIAexpress Type IV Kit 构建体可以转化至 E. coli 中，用作昆虫细胞中重组蛋白表达的穿梭载体，或转染至哺乳动物细胞中。
应用
QIAexpress Expression System 提供适用于许多应用的蛋白质高水平表达，包括：
- 功能性构象活性蛋白质的纯化
- 在变性条件下进行纯化用于抗体生产
- 结晶用于三维结构测定
- 涉及蛋白质-蛋白质和蛋白质-DNA 相互作用的检测
辅助数据和图表
pQE 载体。
pQE 载体。
规格
| 特点 | 规格 |
|---|---|
| applications | 蛋白质组学 |
| yield | 总蛋白的 <50% |
| specialfeature | 用于一步法纯化的通用型、完整系统 |
| tag | 6xHis 标签 |
| processing | 手动 |
| startmaterial | 细胞裂解物 |
| norcterminaltag | N-末端标签 |
资源
产品选择指南 (1)
安全数据表 (1)
补充实验方案 (2)
试剂盒操作手册 (1)
快速启动实验方案 (2)
Certificates of Analysis (1)
Kit Handbooks (1)
Safety Data Sheets (1)
Supplementary Protocols (2)
Quick-Start Protocols (2)
Selection Guides (1)
文献
YtsJ has the major physiological role of the four paralogous malic enzyme isoforms in Bacillus subtilis.
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