QuantiTect RT-PCR Kit

用于使用 SYBR® Green I 进行一步法 qRT-PCR 以及使用序列特异性探针进行基因表达分析的一步法 qRT-PCR 和多重 qRT-PCR

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是否需要商用批量、定制或优化产品?我们还提供物流、合规等方面的支持。主动联系,与 QIAGEN 战略合作伙伴及 OEM 合作

QuantiTect Probe RT-PCR Kit (200)

目录编号 / ID.   204443

适用于 200 次 50 µl 反应:3 x 1.7 ml 2x QuantiTect Probe RT-PCR Master Mix、100 µl QuantiTect RT Mix、2 x 2 ml RNase-Free Water
US$887.00
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检测类型
Probe
SYBR Green
Multiplex Probe
反应
200
1000
QuantiTect RT-PCR Kit 旨在用于分子生物学应用。这些产品不能用于疾病诊断、预防和治疗。
是否需要商用批量、定制或优化产品?我们还提供物流、合规等方面的支持。主动联系,与 QIAGEN 战略合作伙伴及 OEM 合作

特点

  • 高度灵敏的低拷贝靶标检测
  • 使用序列特异性探针或 SYBR Green 的 qRT-PCR
  • 对跨越多个数量级的模板进行精确定量
  • 无需优化反应和循环反应条件
  • 在一管反应中检测参考基因和多达 3 个靶标

产品详情

QuantiTect RT-PCR Kit 可使用序列特异性探针或 SYBR Green I 检测,通过一步法 Real-time PCR 对 RNA 靶标进行灵敏定量。该试剂盒还能通过多重实时一步法 RT-PCR,在一管反应中可靠地定量多达 5 个 RNA 靶标。即用型预混液中热启动和独特 PCR 缓冲液系统相结合,可确保在任何实时定量 PCR 仪上无需优化便可进行高灵敏度的 qRT-PCR。dNTP 混合物包括 dUTP,可选择用 UNG 处理。为方便起见,QuantiTect 一步法 RT-PCR 试剂盒中的预混液可存放在 2–8°C 环境下。

有两种试剂盒格式可用于使用序列特异性探针的多重 RT-PCR:适用于需要 ROX 染料进行荧光归一化处理的定量 PCR 仪的 QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit;适用于所有其他定量 PCR 仪的 QuantiTect Multiplex RT-PCR NoROX Kit。QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit 附带经过优化的 RT 反应混合液,可在宽广的 RNA 模板量范围内实现高效、灵敏的逆转录。

绩效

与其他聚合酶相比,QuantiTect 一步法 RT-PCR 试剂盒所含的 HotStarTaq DNA Polymerase 能提供最严格的热启动,从而提高 PCR 反应的特异性。
QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit 含有独特的逆转录酶混合物,能在多种 RNA 模板量下高效、灵敏地合成 cDNA,并能在宽线性范围内进行特异性定量(请参阅图“ 一步法和两步法 RT-PCR 的结果相当”)。

QuantiTect Probe RT-PCR Kit 具有独特的 RT-PCR 缓冲液,可促进引物和探针高特异性地退火到 PCR 模板。HotStarTaq DNA Polymerase 和 RT-PCR 缓冲液的独特成分使 QuantiTect Probe RT-PCR Kit 能对低拷贝 RNA 靶标进行灵敏定量,并能在宽线性范围内准确定量(请参阅图“ 灵敏度和效率高,动态范围广”)。

在一管反应中依次进行逆转录和 PCR 不会影响灵敏度,表现在其 CT 值与实时两步法 RT-PCR 相当(请参阅图“ 与两步法 RT-PCR 性能相当的一步法 RT-PCR – A”和“ 与两步法 RT-PCR 性能相当的一步法 RT-PCR – B”,以及表“与两步法 RT-PCR 性能相当的一步法 RT-PCR”)。

与两步法 RT-PCR 性能相当的一步法 RT-PCR。

cDNA/RNA 量

平均 Ct

(两步法 RT-PCR)

平均 Ct

(一步法 RT-PCR)

100 ng 24.66 24.66
10 ng 28.15 27.84
1 ng 31.42 31.49
0.1 ng 34.80 34.56
0.01 ng 37.78 37.66

在多重 qRT-PCR 中,使用 QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit 可以灵敏地检测到低至 10 个拷贝的靶标序列(请参阅图“ 在双重 PCR 中可检测到低至 10 个拷贝的靶标 RNA”)。通过对同一孔或管中的靶标基因和内源对照基因的表达进行定量,可实现基因表达的精确相对定量。使用 QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit,多重反应中靶标的 CT 值与在单独反应中扩增靶标的对照实验中获得的 CT 值相当(请参阅图“ 三重 PCR 和单次 PCR 的扩增效果相当”)。这表明,在同一多重反应中,不同的靶标可以高效、灵敏地扩增而不会相互影响。

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原理

QuantiTect RT-PCR Kit 含有经过优化的即用型预混液,可使用 SYBR Green I 或序列特异性探针对 RNA 靶标进行高特异性和灵敏度的实时定量。QuantiTect SYBR Green RT-PCR 预混液中的荧光染料 SYBR Green I 可以分析多种不同的靶标,而无需合成靶标特异性标记探针(请参阅表“2x QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit 的组分”)。

2x QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit 的组分

组分 特点 优势
HotStarTaq DNA Polymerase 在 95ºC 下 15 分钟活化 在室温下配制 qPCR 反应
QuantiTect SYBR Green RT-PCR Buffer NH4+ 和 K+ 离子的平衡组合 特异性引物退火确保可靠的 PCR 结果
dNTP 混合物 包括 dUTP,可部分取代 dTTP,并可进行可选的 UNG 反应处理 通过可选的 UNG 处理消除 PCR 产物的残留污染
SYBR Green I 染料 结合双链 DNA 后产生强荧光信号 高灵敏度定量
ROX 染料 用于对 Applied Biosystems 并可选择在 Agilent 仪器上对荧光信号进行归一化处理 可在需要 ROX 染料的定量 PCR 仪上精确定量。不会干扰其他实时定量 PCR 仪上的反应
Omniscript 和 Sensiscript Reverse Transcriptase 与 RNA 具有高亲和力的特殊酶混合物 即使通过复杂的二级结构也能转录 RNA

QuantiTect Probe RT-PCR Kit 含有经过优化的即用型预混液,可使用序列特异性探针对 RNA 靶标进行高特异性和灵敏度的实时定量(请参阅表“2x QuantiTect Probe RT-PCR Kit 的组分”)。这些试剂盒设计用于所有类型的序列特异性探针,包括水解探针(例如 TaqMan® 和其他双标记探针)、FRET 探针及分子信标。

2x QuantiTect Probe RT-PCR Kit 的组分

组分 特点 优势
HotStarTaq DNA Polymerase 在 95ºC 下 15 分钟活化 在室温下配制 qPCR 反应
QuantiTect Probe RT-PCR Buffer NH4+ 和 K+ 离子的平衡组合 特异性引物退火确保可靠的 PCR 结果
dNTP 混合物 包括 dUTP,可部分取代 dTTP,并可进行可选的 UNG 反应处理 通过可选的 UNG 处理消除 PCR 产物的残留污染
SYBR Green I 染料 结合双链 DNA 后产生强荧光信号 高灵敏度定量
ROX 染料 用于对 Applied Biosystems 并可选择在 Agilent 仪器上对荧光信号进行归一化处理 可在需要 ROX 染料的定量 PCR 仪上精确定量。不会干扰其他实时定量 PCR 仪上的反应
Omniscript 和 Sensiscript Reverse Transcriptase 与 RNA 具有高亲和力的特殊酶混合物 即使通过复杂的二级结构也能转录 RNA

通过对同一孔或管中的靶标基因和内源对照基因的表达进行定量,可实现基因表达的精确相对定量。QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit 中经优化的预混液可确保多重反应中 PCR 产物的扩增效率和灵敏度与相应单次扩增反应中的 PCR 产物相同(请参阅表“2x QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit 的组分”)。使用该试剂盒可检测到低至 10 个拷贝的靶标基因。

2x QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit 的组分

组分 特点 优势
HotStarTaq DNA Polymerase 在 95ºC 下 15 分钟活化 在室温下配制 qPCR 反应
QuantiTect Multiplex RT-PCR Buffer NH4+ 和 K+ 离子的平衡组合 特异性引物退火确保可靠的 PCR 结果
Synthetic Factor MP 可在一管反应中对多达 4 个基因进行可靠的多重分析
dNTP 混合物 包括 dUTP,可部分取代 dTTP,并可进行可选的 UNG 反应处理 通过可选的 UNG 处理消除 PCR 产物的残留污染
ROX 染料* 用于对 Applied Biosystems 并可选择在 Agilent 仪器上对荧光信号进行归一化处理 可在需要 ROX 染料的定量 PCR 仪上精确定量。不会干扰其他实时定量 PCR 仪上的反应
Omniscript 和 Sensiscript Reverse Transcriptase 与 RNA 具有高亲和力的特殊酶混合物 即使通过复杂的二级结构也能转录 RNA

QuantiTect RT-PCR Kit – 的 PCR 缓冲液 – 中 K+ 和 NH4+ 离子的平衡组合,加上 QuantiTect Multiplex RT-PCR 缓冲液中独特的 Synthetic Factor MP,可促进特异性引物退火,从而实现高 RT-PCR 特异性和灵敏度(请参阅图“ 特异性引物退火”)。此外,经过优化的逆转录酶混合物可从多种 RNA 模板量合成 cDNA,而 HotStarTaq DNA Polymerase 可提供严格的热启动,防止形成非特异性产物。

QuantiTect RT-PCR 预混液中还含有 dUTP,可在开始 PCR 之前用尿嘧啶-N-糖基化酶 (Uracil-N-Glycosylase, UNG) 进行预处理,确保任何具有污染性的 PCR 产物都不会影响后续的 PCR 反应。

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程序

QuantiTect RT-PCR Kit 无需进行可能既繁琐又耗时的反应条件优化。只需将引物和模板添加到即用型 QuantiTect SYBR Green RT-PCR 预混液 – 中,或将引物、探针和模板添加到即用型 QuantiTect Probe RT-PCR 预混液 – 中,然后启动反应(请参阅流程图“ 使用 SYBR Green 的一步法 RT-PCR”和“ 使用序列特异性探针的一步法 RT-PCR)。按照手册中的方案,在任何实时定量 PCR 仪上获得快速可靠的结果。如有需要,可用尿嘧啶-N-糖基化酶 (Uracil-N-Glycosylase, UNG) 对反应进行预处理,以消除先前反应中 PCR 产物的残留污染。

将 QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit 与 QuantiTect Primer Assay 结合使用,可确保获得高特异性的基因表达分析结果。这些引物是经过生物信息验证的全基因组引物集,可用于检测人、小鼠、大鼠和许多其他物种的转录物。您可以通过 GeneGlobe 方便地在线订购 QuantiTect Primer Assay。

QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit 手册包含一个可用于所有实时定量 PCR 仪的单一方案,还列出了推荐使用的染料。试剂盒提供时预混液中可包含或不含 ROX 参比荧光染料,因此几乎可在任何实时定量 PCR 仪上使用(请参阅表“选择合适的 QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit”)。由于 ROX 浓度经过优化,即使是低拷贝数也能通过自动数据分析检测出来。

选择合适的 QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit

ROX 染料试剂盒兼容的定量 PCR 仪
在预混液中提供QuantiTect Multiplex RT-PCR KitApplied Biosystems 的循环仪
预混液中不存在QuantiTect Multiplex RT-PCR NR KitRotor-Gene 定量 PCR 仪,以及来自 Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche、Agilent 及其他供应商的定量 PCR 仪
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应用

QuantiTect RT-PCR Kit 可用于在任何实时定量 PCR 仪上对 RNA 靶标进行基因表达分析。这包括来自 Applied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche 和 Agilent 的仪器。对于 Rotor-Gene Q 和其他 Rotor-Gene 定量 PCR 仪,我们建议使用 Rotor-Gene Probe RT-PCR Kit、Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kit 或 Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kit,它们是专为在这些仪器上进行快速循环反应而开发的。

 

QuantiTect RT-PCR Kit 的比较
特点 QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit QuantiTect Probe RT-PCR Kit QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit
应用 RNA 靶标的实时定量 RNA 靶标的实时定量 RNA 靶标的多重实时定量
反应类型 一步法 RT-PCR 一步法 RT-PCR 多重一步法 RT-PCR
实时或终点 实时 实时 实时
样本/靶标类型 RNA RNA RNA
单重或多重 单重 单重 单重
SYBR Green I 或序列特异性探针 SYBR Green I 序列特异性探针 序列特异性探针
热循环仪 所有实时定量 PCR 仪(例如 LightCycler、Rotor-Gene、ABI) 所有实时定量 PCR 仪(例如 LightCycler、Rotor-Gene、ABI) 专用于多重 PCR 的实时定量 PCR 仪(例如大多数 Applied Biosystems 实时定量 PCR 仪、Roche LightCycler 480 和 Bio-Rad iCycler iQ)
有或无 ROX 有 ROX 有 ROX 有或无 ROX

辅助数据和图表

资源

产品介绍与指南 (1)
试剂盒操作手册 (4)
For quantitative, real-time one-step RT-PCR using SYBR Green I
For quantitative, real-time one-step RT-PCR using sequence-specific probes
For genomewide, ready-to-use real-time RT-PCR assays using SYBR Green detection
QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit - with master mix containing ROX passive reference dye QuantiTect Multiplex RT-PCR NR Kit - with master mix free of ROX passive reference dye For gene expression analysis by quantitative, multiplex, real-time one-step RT-PCR using sequence-specific probes
安全数据表 (2)
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
Certificates of Analysis (1)
Safety Data Sheets (3)
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
Brochures & Guides (1)
Kit Handbooks (4)
For genomewide, ready-to-use real-time RT-PCR assays using SYBR Green detection
QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit - with master mix containing ROX passive reference dye QuantiTect Multiplex RT-PCR NR Kit - with master mix free of ROX passive reference dye For gene expression analysis by quantitative, multiplex, real-time one-step RT-PCR using sequence-specific probes
For quantitative, real-time one-step RT-PCR using sequence-specific probes
For quantitative, real-time one-step RT-PCR using SYBR Green I