首先，使用限制性内切酶消化插入片段和载体 DNA，以产生具有黏端或平端的 DNA 片段。接下来，提取期望的 DNA 片段，随后连接，然后用 DNA 连接酶进行处理。最后，将得到的完整载体转化到感受态 E. coli 细胞中，并通过合适的遗传选择方法鉴定转化体。 

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