therascreen NRAS Pyro Kit

基于测序的方法定量检测NRAS基因中癌症相关的突变

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therascreen NRAS Pyro Kit (24)

目录编号 / ID. 971530

For 24 reactions: Sequencing Primers, PCR Primers, Unmethylated Control DNA, PyroMark PCR Master Mix, CoralLoad Concentrate, and therascreen Buffers and Reagents

MX$52,784.00

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数量

therascreen NRAS Pyro Kit用于体外诊断。

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特点

符合欧洲体外诊断98/79/EC指令
实时获得多个结果
准确定量NRAS基因中的突变
简单说明复杂的序列信息

产品详情

therascreen NRAS Pyro Kit是用于鉴定NRAS基因突变和缺失的分子检测试剂盒。该试剂盒包含扩增NRAS基因所需的引物和试剂，以及在PyroMark Q24实时定量焦磷酸序列分析仪上使用焦磷酸测序技术实时定量检测突变所需的缓冲液、引物和试剂。

绩效

线性

将载有编码子12和13 GGT->GAT和编码子61 CAA->CGA的突变的质粒和野生型基因的质粒混合测量其线性（参见"Linearity of GGT->GAT mutation"）。这些质粒以四种不同的突变质粒比例（5、10、30、50%）混合。每种质粒混合物用三种不同量的therascreen NRAS Pyro Kit使用焦磷酸测序技术进行分析，重复分析三次。

检测5–50%突变范围时，含有5%的容许非线性度的结果是线性的。检测编码子13 GGT->GAT和编码子61 CAA->CGA的突变获得同样的结果。

精密度

精密度用于检测这些试验的总的差异，对如上所述的质粒混合物进行三个不同水平的分析，每个混合物重复测量三次以获得精密度数据。

重复性（批内和批间差）基于线性测定数据计算得出（用不同的therascreen NRAS Pyro Kit在同一天测定三次）。中间精密度（实验室内部差异）由同一实验室三次检测得出，这三次检测分别由不同的操作者用不同的PyroMark Q24实时定量焦磷酸序列分析仪以及不同的therascreen NRAS Pyro Kit在不同的三天进行。重现性（实验室之间的差异）由使用不同的therascreen NRAS Pyro Kit在两个不同的实验室分别进行检测得出。

在5–50%的突变测量范围内，编码子12 GGT>GAT的突变检测的重复性、中间精密度和重现性分别为1.2–1.9%、1.0–2.0%、1.3–3.1%。检测编码子13 GGT->GAT和编码子61 CAA->CGA的突变获得同样的结果。

编码子12 GGT>GAT的突变精密度
% 突变质粒	重复性（SD）	中间精密度（SD）	重现性（SD）
5	7.5, 1.2	7.3, 1.0	6.7, 1.3
10	14.6, 1.3	13.5, 1.1	13.7, 1.3
30	37.8, 1.9	37.9, 1.5	36.1, 2.9
50	59.8, 1.7	60.4, 2.0	57.5, 3.1

原理

therascreen NRAS Pyro Kit用于实时定量检测人NRAS基因编码子12、13和61的突变，在PyroMark Q24实时定量焦磷酸序列分析仪上使用焦磷酸测序技术检测。NRAS基因编码一种GTPase，该酶是成神经细胞瘤RAS病毒（v-ras）原癌基因同源物。在所有恶性黑素瘤中，有将近13–25%发生NRAS基因突变，通常在编码子12、13和61突变。这些突变激活了NRAS信号通路。

可检测以下种类的突变：

编码子12/13：G12A、G12C、G12D、G12R、G12S、G12V、G13A、G13C、G13D、G13R、G13S和G13V
编码子61：Q61E、Q61H、Q61K、Q61L、Q61P和Q61R

程序

该试剂盒包含2部分实验：一个用于检测编码子12和13的突变；另一个用于检测编码子61的突变（参见"Illustration of the NRAS assay"和"Pyrogram trace of a normal genotype in codon 12-13"）。运用PCR技术对这两个片段分别进行扩增，测定特定区域的核酸序列。使用该法进行定量和定性分析时，特定区域周围的核酸序列峰被视为标准峰和参照峰。

使用针对编码子12/13和编码子61的引物对两个片段PCR扩增后，将扩增子固定在高性能链霉素亲和琼脂糖上。将单链DNA和相应序列的引物退火处理得到DNA。然后在PyroMark Q24实时定量焦磷酸序列分析仪上设置程序和运行程序对样品进行分析。运行后可以通过调节"Sequence to Analyze"来检测稀有突变（参见"Pyrogram trace of a GGT to AGT mutation in base 1 of codon 12"和"Pyrogram trace after reanalysis of the sample in the previous figure"）。