BRAF Pyro Kit

基于序列定量检测BRAF基因中的突变

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BRAF Pyro Kit (24)

目录编号 / ID. 970470

For 24 reactions: Sequencing Primers, PCR Primers, Unmethylated Control DNA, PyroMark PCR Master Mix, CoralLoad Concentrate, Buffers, and Reagents

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BRAF Pyro Kit 旨在用于分子生物学应用。该产品不能用于疾病诊断、预防和治疗。

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特点

实时获得全面的结果
准确定量BRAF基因中的突变
简便检测复杂的突变
序列背景提供内置的分析参照
灵活的后续分析

产品详情

BRAF Pyro Kit是用于检测BRAF基因中突变的分子检测试剂盒。该试剂盒包含扩增BRAF基因所需的引物和试剂，以及外加缓冲液、引物和试剂，用于在PyroMark Q24实时定量焦磷酸序列分析仪上采用焦磷酸测序技术实时定量检测突变。

原理

BRAF Pyro Kit在PyroMark Q24实时定量焦磷酸序列分析仪上采用焦磷酸测序技术实时定量检测人BRAF基因中编码子600和编码子464–469的突变。BARP基因编码了v-raf鼠类肉瘤病毒癌基因homolog B1激酶，一种EGFR下游的原癌基因。研究发现，在所有癌症患者中有6–8%表现出BRAP基因的突变，在黑素瘤（50–60%）、结肠癌（10%）、甲状腺癌（39%）中BRAP基因突变则更为频繁。将近90%是V600E突变。

程序

该试剂盒包含2部分实验：一个用于检测编码子600的突变，另一个用于检测编码子464–469的突变（参见" Illustration of the BRAF assay"）。运用PCR技术对这两个片段分别进行扩增，测定特定区域的核酸序列。使用该法进行定量和定性分析时，特定区域周围的核酸序列峰被视为标准峰和参照峰。

使用针对编码子600和编码子464–469的引物对两个片段PCR扩增后，将扩增子固定在高性能链霉素亲和琼脂糖上。将单链DNA和相应序列的引物退火处理得到DNA。然后在PyroMark Q24实时定量焦磷酸序列分析仪上设置程序和运行程序对样品进行分析（参见" Pyrogram trace of a normal genotype in codon 600"，" Pyrogram trace of a normal genotype in codons 464-469"和" Pyrogram trace of a GTG to GAG mutation in base 2 of codon 600"）。运行后可以通过调节"Sequence to Analyze"来检测稀有的突变。