QuantiTect RT-PCR Kit

• 高度灵敏的低拷贝靶标检测
• 使用序列特异性探针或 SYBR Green 的 qRT-PCR
• 对跨越多个数量级的模板进行精确定量
• 无需优化反应和循环反应条件
• 在一管反应中检测参考基因和多达 3 个靶标

QuantiTect RT-PCR Kit 可使用序列特异性探针或 SYBR Green I 检测，通过一步法 Real-time PCR 对 RNA 靶标进行灵敏定量。该试剂盒还能通过多重实时一步法 RT-PCR，在一管反应中可靠地定量多达 5 个 RNA 靶标。即用型预混液中热启动和独特 PCR 缓冲液系统相结合，可确保在任何实时定量 PCR 仪上无需优化便可进行高灵敏度的 qRT-PCR。dNTP 混合物包括 dUTP，可选择用 UNG 处理。为方便起见，QuantiTect 一步法 RT-PCR 试剂盒中的预混液可存放在 2–8°C 环境下。

有两种试剂盒格式可用于使用序列特异性探针的多重 RT-PCR：适用于需要 ROX 染料进行荧光归一化处理的定量 PCR 仪的 QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit；适用于所有其他定量 PCR 仪的 QuantiTect Multiplex RT-PCR NoROX Kit。QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit 附带经过优化的 RT 反应混合液，可在宽广的 RNA 模板量范围内实现高效、灵敏的逆转录。

与其他聚合酶相比，QuantiTect 一步法 RT-PCR 试剂盒所含的 HotStarTaq DNA Polymerase 能提供最严格的热启动，从而提高 PCR 反应的特异性。
QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit 含有独特的逆转录酶混合物，能在多种 RNA 模板量下高效、灵敏地合成 cDNA，并能在宽线性范围内进行特异性定量（请参阅图“ 一步法和两步法 RT-PCR 的结果相当”）。

QuantiTect Probe RT-PCR Kit 具有独特的 RT-PCR 缓冲液，可促进引物和探针高特异性地退火到 PCR 模板。HotStarTaq DNA Polymerase 和 RT-PCR 缓冲液的独特成分使 QuantiTect Probe RT-PCR Kit 能对低拷贝 RNA 靶标进行灵敏定量，并能在宽线性范围内准确定量（请参阅图“ 灵敏度和效率高，动态范围广”）。

在一管反应中依次进行逆转录和 PCR 不会影响灵敏度，表现在其 CT 值与实时两步法 RT-PCR 相当（请参阅图“ 与两步法 RT-PCR 性能相当的一步法 RT-PCR – A”和“ 与两步法 RT-PCR 性能相当的一步法 RT-PCR – B”，以及表“与两步法 RT-PCR 性能相当的一步法 RT-PCR”）。

与两步法 RT-PCR 性能相当的一步法 RT-PCR。

在多重 qRT-PCR 中，使用 QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit 可以灵敏地检测到低至 10 个拷贝的靶标序列（请参阅图“ 在双重 PCR 中可检测到低至 10 个拷贝的靶标 RNA”）。通过对同一孔或管中的靶标基因和内源对照基因的表达进行定量，可实现基因表达的精确相对定量。使用 QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit，多重反应中靶标的 CT 值与在单独反应中扩增靶标的对照实验中获得的 CT 值相当（请参阅图“ 三重 PCR 和单次 PCR 的扩增效果相当”）。这表明，在同一多重反应中，不同的靶标可以高效、灵敏地扩增而不会相互影响。

QuantiTect RT-PCR Kit 含有经过优化的即用型预混液，可使用 SYBR Green I 或序列特异性探针对 RNA 靶标进行高特异性和灵敏度的实时定量。QuantiTect SYBR Green RT-PCR 预混液中的荧光染料 SYBR Green I 可以分析多种不同的靶标，而无需合成靶标特异性标记探针（请参阅表“2x QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit 的组分”）。

2x QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit 的组分

QuantiTect Probe RT-PCR Kit 含有经过优化的即用型预混液，可使用序列特异性探针对 RNA 靶标进行高特异性和灵敏度的实时定量（请参阅表“2x QuantiTect Probe RT-PCR Kit 的组分”）。这些试剂盒设计用于所有类型的序列特异性探针，包括水解探针（例如 TaqMan® 和其他双标记探针）、FRET 探针及分子信标。

2x QuantiTect Probe RT-PCR Kit 的组分

通过对同一孔或管中的靶标基因和内源对照基因的表达进行定量，可实现基因表达的精确相对定量。QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit 中经优化的预混液可确保多重反应中 PCR 产物的扩增效率和灵敏度与相应单次扩增反应中的 PCR 产物相同（请参阅表“2x QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit 的组分”）。使用该试剂盒可检测到低至 10 个拷贝的靶标基因。

2x QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit 的组分

QuantiTect RT-PCR Kit – 的 PCR 缓冲液 – 中 K⁺ 和 NH₄⁺ 离子的平衡组合，加上 QuantiTect Multiplex RT-PCR 缓冲液中独特的 Synthetic Factor MP，可促进特异性引物退火，从而实现高 RT-PCR 特异性和灵敏度（请参阅图“ 特异性引物退火”）。此外，经过优化的逆转录酶混合物可从多种 RNA 模板量合成 cDNA，而 HotStarTaq DNA Polymerase 可提供严格的热启动，防止形成非特异性产物。

QuantiTect RT-PCR 预混液中还含有 dUTP，可在开始 PCR 之前用尿嘧啶-N-糖基化酶 (Uracil-N-Glycosylase, UNG) 进行预处理，确保任何具有污染性的 PCR 产物都不会影响后续的 PCR 反应。

QuantiTect RT-PCR Kit 无需进行可能既繁琐又耗时的反应条件优化。只需将引物和模板添加到即用型 QuantiTect SYBR Green RT-PCR 预混液 – 中，或将引物、探针和模板添加到即用型 QuantiTect Probe RT-PCR 预混液 – 中，然后启动反应（请参阅流程图“ 使用 SYBR Green 的一步法 RT-PCR”和“ 使用序列特异性探针的一步法 RT-PCR）。按照手册中的方案，在任何实时定量 PCR 仪上获得快速可靠的结果。如有需要，可用尿嘧啶-N-糖基化酶 (Uracil-N-Glycosylase, UNG) 对反应进行预处理，以消除先前反应中 PCR 产物的残留污染。

将 QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit 与 QuantiTect Primer Assay 结合使用，可确保获得高特异性的基因表达分析结果。这些引物是经过生物信息验证的全基因组引物集，可用于检测人、小鼠、大鼠和许多其他物种的转录物。您可以通过 GeneGlobe 方便地在线订购 QuantiTect Primer Assay。

QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit 手册包含一个可用于所有实时定量 PCR 仪的单一方案，还列出了推荐使用的染料。试剂盒提供时预混液中可包含或不含 ROX 参比荧光染料，因此几乎可在任何实时定量 PCR 仪上使用（请参阅表“选择合适的 QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit”）。由于 ROX 浓度经过优化，即使是低拷贝数也能通过自动数据分析检测出来。

选择合适的 QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit

QuantiTect RT-PCR Kit 可用于在任何实时定量 PCR 仪上对 RNA 靶标进行基因表达分析。这包括来自 Applied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche 和 Agilent 的仪器。对于 Rotor-Gene Q 和其他 Rotor-Gene 定量 PCR 仪，我们建议使用 Rotor-Gene Probe RT-PCR Kit、Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kit 或 Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kit，它们是专为在这些仪器上进行快速循环反应而开发的。