QuantiFast Pathogen +IC Kits

• Detección simultánea de la diana del microorganismo patógeno y del control interno
• Mezcla maestra quíntuple para mayor sensibilidad con más entrada de muestra
• Interpretación correcta de los resultados negativos para una mayor seguridad de los procesos
• Detección clara de señales de diana positivas débiles
• Protocolo universal rápido tanto en termocicladores estándar como rápidos

Los QuantiFast Pathogen +IC Kits se han diseñado para la detección sensible y rápida, por real-time PCR o por RT-PCR de un paso, de ácidos nucleicos de microorganismos patógenos mediante sondas específicas de secuencia. Para alcanzar un alto nivel de seguridad del proceso a través de la interpretación correcta de los resultados negativos, cada kit contiene reactivos para la detección múltiple en tiempo real de hasta 4 dianas de microorganismos patógenos (p. ej., virus, bacterias, hongos, etc.) más el control interno (IC). Hay dos formatos de kit disponibles: El QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit para la detección de ARN vírico, que contiene un molde de control interno de ARN, más el juego de cebadores y sondas de control interno o el QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit para la detección de ADN vírico, bacteriano o fúngico, que contiene un molde de control de ADN, más el juego de cebadores y sondas de control interno. En ambos kits, el ROX se suministra en 2 tubos de diferentes concentraciones, lo que permite el uso en cualquier instrumento en tiempo real. Por motivos de conveniencia, la mezcla maestra puede almacenarse a una temperatura de 2-8 °C.

Los QuantiFast Pathogen +IC Kits permiten la detección simultánea de las dianas de ADN o ARN vírico más el control interno suministrado en un amplio rango lineal sin pérdida de sensibilidad durante el multiplexado (consulte las figuras  Detección sensible de Norovirus en el Rotor-Gene Q y  Gran linealidad y precisión de la detección simple y doble). El protocolo se ha desarrollado para llevar a cabo experimentos de termociclado rápido con gran fiabilidad (consulte las figuras “ Detección sensible del VHB-1 en el Rotor-Gene Q” y “ Detección sensible del VHB-1 en el ABI 7500”). La amplificación combinada de la dianas del microorganismo patógeno y el control interno utilizando los QuantiFast Pathogen +IC Kits aumenta la seguridad del proceso al garantizar la interpretación correcta de los resultados negativos (consulte la figura “ Interpretación correcta de los resultados negativos”).

El QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer, suministrado con los kits, estabiliza los patrones de ARN y ADN durante la preparación de la reacción y la dilución y previene la pérdida de ácidos nucleicos en las superficies de plástico, como tubos o puntas de pipetas. Permite la dilución fiable de patrones utilizados para cuantificar ácidos nucleicos víricos, lo que ofrece un rango lineal más amplio, desde valores de C_T bajos a altos. El patrón garantiza un almacenamiento más prolongado de los patrones sin degradación (consulte la figura “ Almacenamiento y dilución fiables de estándares de ARN”).

Para permitir un alto nivel de seguridad del proceso a través de la interpretación correcta de los resultados negativos, cada QuantiFast Pathogen_IC Kit contiene reactivos para la detección múltiple en tiempo real de las dianas de microorganismos patógenos definidas por el usuario con el control interno. La amplificación de genes diana y de control en la misma reacción, en lugar de en reacciones independientes, aumenta la fiabilidad de la cuantificación genética al reducir al mínimo los errores de manipulación.

Los QuantiFast Pathogen +IC Kits ofrecen una detección sensible y rápida, por PCR múltiple en tiempo real o por RT-PCR de un paso, de ácidos nucleicos de microorganismos patógenos en el primer intento (consulte el diagrama de flujo “ Kits de análisis múltiples de QIAGEN”). La mezcla maestra optimizada garantiza que los productos de PCR de una reacción múltiple se amplifiquen con la misma eficacia y sensibilidad que los productos de PCR en la reacción de amplificación simple correspondiente. El tampón de PCR rápida especialmente desarrollado contiene el novedoso aditivo Q-Bond, que reduce de manera significativa los tiempos de desnaturalización, hibridación y extensión (consulte la figura “ Hibridación rápida de cebadores”). Una combinación equilibrada de iones de K⁺ y NH₄⁺, así como el exclusivo Factor MP sintético, favorecen la hibridación estable y eficaz de cebadores y sondas al molde de ácido nucleico, lo que resulta en una alta eficacia de la PCR (consulte la figura “ Tampón de PCR exclusivo”). Además, la exclusiva formulación de la Sensiscript Reverse Transcriptase garantiza la transcripción inversa muy sensible del ARN vírico, mientras que la HotStarTaq Plus DNA Polymerase proporciona un riguroso hot start, lo que impide la formación de productos no específicos.

Los QuantiFast Pathogen +IC Kits proporcionan un procedimiento sencillo para la detección de un microorganismo patógeno definido por el usuario y el control interno. Contienen una mezcla maestra lista para usar para la detección en tiempo real de ARN vírico (RT-PCR de un paso) o de ADN fúngico, bacteriano y vírico (PCR). No es necesario optimizar las condiciones de reacción y termociclado. Simplemente, remueva la mezcla maestra suministrada con el ensayo de microorganismos patógenos (cebadores y sonda), el Internal Control Assay y el Internal Control DNA o RNA. Como alternativa, si el control interno se ha añadido al procedimiento de purificación de muestras, añada agua libre de ARNasas en lugar de Internal Control DNA o RNA a la mezcla de reacción. A continuación, añada su ARN o ADN de la muestra e inicie la reacción en cualquier termociclador. El manual de uso del kit contiene protocolos optimizados para el uso con sondas TaqMan® en una gran variedad de termocicladores. También contiene recomendaciones para la selección de combinaciones de colorantes.

Cada QuantiFast Pathogen +IC Kit contiene el Internal Control Assay y el Internal Control DNA o RNA para su uso como un control de amplificación mediante adición directa a la mezcla de la reacción. En su defecto, el IC puede añadirse al procedimiento de purificación para controlar tanto el proceso de purificación como la amplificación. Para añadir el control interno al procedimiento de purificación, se pueden pedir por separado Internal Control DNA o RNA (alta conc.) (consulte la figura “ Control interno de QIAGEN”).

Los QuantiFast Pathogen +IC Kits proporcionan RT-PCR de un paso o real-time PCR sensibles mediante el uso de sondas específicas de secuencia para la detección simultánea de ADN y/o ARN de microorganismos patógenos, incluido un control interno. Los kits pueden utilizarse en una gran variedad de termocicladores en tiempo real, incluidos los termocicladores de QIAGEN, Applied Biosystems, Bio-Rad, Roche (excepto los termocicladores de capilares) y Agilent.