FlexiTube siRNA

• 経済的なsiRNAにより多くの遺伝子解析が可能
• どの遺伝子にも対応する最適なRNAi ソリューション
• 最新のsiRNAデザインでオフターゲット効果のリスクを最小限に抑制
• GeneGlobeポータルサイトでsiRNAを簡単に検索／注文

FlexiTube siRNAには、FlexiTube siRNA およびFlexiTube GeneSolutionの2つの異なる製品がございます。

FlexiTube siRNAにより少数の遺伝子を対象としたRNAi解析実験を経済的に行なえます。ヒト、マウス、ラットのsiRNAでは 5 nmolあるいは20 nmolで、ヒト、マウスのsiRNAでは1 nmolの経済的な合成スケールが入手可能です。

FlexiTube GeneSolutionは1標的遺伝子当たり4種類のsiRNA（1 nmol）をセットにした遺伝子特異的な製品です。FlexiTube GeneSolution を使用することで、複数のsiRNA による信頼性の高い検証実験が効果的に行なえます。革新的なHP OnGuard siRNA Design を用いてデザインされたFlexiTube siRNA およびFlexiTube GeneSolutionは、QIAGENのGeneGlobeポータルサイトから入手可能です。

性能保証

FlexiTube siRNAには1回だけ無料で再納品する保証が付いております。同じターゲット遺伝子に対して数種類のFlexiTube siRNAsを注文され、そのうち少なくとも2種類がターゲット遺伝子を 70％以上ノックダウンしなかった場合、QIAGEN は追加料金無しで、2種類のsiRNAを1度だけ再納品します。再納品に際しては適切なトランスフェクション条件下でsiRNAがmRNAレベルでターゲット遺伝子を最低70％ノックダウンできなかったことを証明するデータが必要です。このデータにはトランスフェクション効率、silencingの定量データ、ポジティブコントロールで70％以上のノックダウン効果を示すデータも含まれます。このオファーは製品納入後6か月まで有効です。

実験的に検証済みの数千のsiRNA

数千のヒトsiRNAにおいて、リアルタイムRT-PCR 解析で70％以上のノックダウン効果のあることが実証済みです。これらの検証済みsiRNAを使用した実験の詳細やノックダウンレベルの情報は GeneGlobeでご覧いただけます。これらのsiRNAは、QIAGENの研究者により行なわれた世界最大規模のsiRNAバリデーションプロジェクトの結果です。このプロジェクトに関する詳細は論文Krueger, U. et al. (2007) Insights into Effective RNAi Gained from Large-Scale siRNA Validation Screening. Oligonucleotides 17, 237をご覧ください。

最先端のsiRNAデザイン

siRNAデザインプロセスにおける進歩により、QIAGENの高性能なHP OnGurard siRNA Designは効果的かつ特異的なsiRNAを確実にお届けします。膨大なRNAi実験のデータセットをもとにしたニューラル·ネットワークテクノロジーを用いてsiRNAをデザインしています。その後、適正に評価された重複のない最新の配列データベースと新しい特徴を取り入れたQIAGEN独自の相同性解析ツールを用いてsiRNAデザインとゲノムの他の配列との相同性をチェックします。HP OnGuard siRNA Designは以下の特長を取り揃えています（表1）。

3' UTR/Seed領域解析

いくつかの研究は、意図していないmRNAの3' 非翻訳領域（UTR）とsiRNAアンチセンス鎖のSeed領域の一致がオフターゲット効果を引き起こしていることを示唆しました（表）。Seed領域は二本鎖siRNAのアンチセンスsiRNA鎖の2～7塩基目にある6ヌクレオチドから構成されています。これらのヌクレオチドのマッチは、siRNAがmiRNAに類似したメカニズムにより標的としない遺伝子の抑制に寄与することがあります。QIAGENでデザインしたsiRNAは、ヒト、ラット、マウスのRefSeqデータベースに由来する独自の3' UTR配列セットを用いて、3' UTR/Seed領域の相補性を解析しています。miRNAに類似するオフターゲット効果に関与する可能性のある全てのホモロジーをチェックするために、これらの配列と各siRNA のアライメントを行なっています。

siRNA Seed領域の6ヌクレオチドのうちの6つが無関係な遺伝子の3' UTR配列とマッチしていることが頻繁にありますが、このようなマッチを示すsiRNAを排除することは不要ですし、実用的でもありません。Seed領域と他の相同性を示す10あるいはそれ以上の塩基とのマッチが一つのsiRNA配列内に認められることは、非常に珍しいことです。このような相同性は、オフターゲット効果を引き起こす可能性がより高いので、これらのsiRNAは取り入れられず、無関係な標的遺伝子に対して有意な相同性が低い他のsiRNAが選択されます。

いくつかの標的遺伝子では、このような相同性をまったく示さないsiRNAを選択することは不可能です。これらの場合には、そのsiRNAが目的としない無関係な遺伝子のEntrezGene IDsをGeneGlobeで提供しています。このタイプの相同性が観察されたということは、これらの遺伝子が必ずしもそのsiRNAにより影響を受けるということではありません。しかし、これらのsiRNAは続く解析で意図しない標的遺伝子へ影響することが考えられます。

FlexiTube siRNAはわずか1 nmolの経済的な合成スケールで少数のsiRNAを（ご注文は4本から）、あるいは 5 nmolおよび20 nmolでご注文いただけます。凍結乾燥のsiRNAをチューブでお届けします。

標的遺伝子の最適なsiRNAセットFlexiTube GeneSolution

関心のある遺伝子（ヒトあるいはマウス）の情報詳細をGeneGlobeポータルサイトに入力するだけで、お客様の標的遺伝子に対する効率的なRNAi ソリューションが提示されます。検索結果は、各遺伝子に対応する4種類の推奨siRNAがFlexiTube GeneSolution（1 nmol）として示されます。公表されているガイドラインでは、RNAi実験結果を確実にするために複数の実験を行なうことが推奨されています（Echeverri, C.J. et al.(2006) Minimizing the risk of reporting false positives in large-scale RNAi screens.Nat. Methods.3, 777; Echeverri, C.J. and Perrimon, N. (2006) High-throughput RNAi screening in cultured cells: a user’s guide.Nature Reviews Genetics 7, 373.）。重複実験では、オフターゲット効果を排除するため同じmRNA 上の異なる領域を標的にしたいくつかの個別のsiRNA を用います。オフターゲットによる表現型は、あるsiRNAが本来の標的転写物だけではなく他の転写物を同時に抑制した際の特異的なパターンにより誘導されます。この現象はsiRNAの配列に直接由来するため、配列の異なる複数種類のsiRNAが同じ配列に起因するオフターゲット効果を引き起こす確率は非常に低くなります。ある表現型を数種類の異なるsiRNAで確認することは、siRNAの特異性を示すために容易に実践できる簡便な方法です。FlexiPlateTube GeneSolutionを用いてヒトおよびマウスの遺伝子に対する複数のRNAi実験が行なえます。お客様の実験に最適なソリューションを直ぐに提供できるように、QIAGENでは各遺伝子に対応する適切なsiRNAをお届けしています。

siRNAの配列情報を添付

全てのsiRNAには無料でsiRNA配列情報が付いています。siRNAの配列を実験結果の解析およびノックダウンの検証のために使用できます。研究論文にsiRNA配列が必要な場合には、掲載することもできます。

修飾オプション

20 nmol スケールのFlexiTube siRNAでは、Alexa Fluor、フルオレセイン、ローダミン、Cy3、Cyanine 670 による標識、アミノ、チオ・リンカーなどの修飾オプションやリン酸修飾が可能です。

ロースループットのsiRNAトランスフェクションにはHiPerFect Transfection Reagent、ハイスループットのsiRNAトランスフェクションにはHiPerFect HTS Reagentをお奨めします。

FlexiTube siRNAおよびFlexiTube GeneSolutionは、少数の標的遺伝子を用いた機能ゲノミクスあるいはパスウェイ解析に最適です。