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Qproteome Cell Compartment Kit
Kat.-Nr. / ID. 37502
Für bis zu 10 subzelluläre Fraktionierungen: Extraktionspuffer, Proteaseinhibitorlösung, Benzonase®.
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Dieses Produkt enthält Stoffe, die unter REACH (EG 1907/2006 Anhang XIV) geregelt sind. Die Verwendung dieses Produkts in der EU ist im Rahmen einer Ausnahmeregelung zulässig (Artikel 56(3)). Weitere Informationen finden Sie in der REACH-Meldung und im Sicherheitsdatenblatt zu diesem Produkt, die beide im Abschnitt „Ressourcen“ dieser Seite zu finden sind.
Qproteome Cell Compartment Kit ist für molekularbiologische Anwendungen vorgesehen. Dieses Produkt ist nicht für die Diagnose, Prävention oder Behandlung einer Krankheit bestimmt.
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Angaben zum Produkt
Eukaryotische Zellen sind komplexe, streng geordnete und hoch strukturierte Systeme. Das Cell Compartment Kit wurde für die schnelle und einfache subzelluläre Fraktionierung von intakten eukaryotischen Zellen und Geweben entwickelt. Durch sequenzielle Zugabe verschiedener Extraktionspuffer zu einem Zellpellet können Proteine in den verschiedenen Zellkompartimenten selektiv isoliert werden.
Leistung
Die Verwendung des Qproteome Cell Compartment Kit ermöglicht die einfache und effektive Zellkompartiment-spezifische Lokalisierung von Markerproteinen aus isolierten Zellen (siehe Abbildung „ Spezifische Trennung von Markerproteinen“ und „ Lokalisierung von Proteinen in Zellen unter verschiedenen Wachstumsbedingungen“) oder aus Gewebeproben (siehe Abbildung „ Lokalisierung von Proteinen in Gewebeproben“).
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Prinzip
Das Kit enthält 4 Extraktionspuffer, welche die sequenzielle Isolierung von Proteinen, die mit dem Zytosol, den Membranen, dem Zellkern und dem Zytoskelett assoziiert sind, aus Zelllysaten oder Geweben ermöglichen.
Verfahren
Die 4 Extraktionspuffer werden nacheinander einem Zellpellet zugesetzt und die entsprechenden Fraktionen werden durch Zentrifugation isoliert (siehe Flussdiagramm).
In einem alternativen Protokoll für Gewebe werden die Proben mit dem TissueRuptor gleichzeitig homogenisiert und aufgeschlossen, bevor sie wie ein Zellpellet verarbeitet werden.
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Anwendungen
Die subzelluläre Fraktionierung von Proteinen kann zur Anreicherung von in geringen Mengen vorliegenden Spezies, zur Bestimmung der subzellulären Lokalisierung von Enzymen, regulatorischen und strukturellen Proteinen und zur Überwachung der kompartimentellen Umverteilung von Biomolekülen unter basalen und stimulierten Bedingungen verwendet werden.
Ergänzende Daten und Abbildungen
Lokalisierung von Proteinen in Zellen unter verschiedenen Wachstumsbedingungen.
Mikroskopische Aufnahmen (obere Abbildungen) von HeLa-Zellen [A] unter normalen Wachstumsbedingungen und [B] nach 4-stündiger Inkubation mit Staurosporin, einem Apoptoseinduktor. Die unteren Abbildungen zeigen Western Blots, die nach Verarbeitung der Zelllysate mit dem Qproteome Cell Compartment Kit erstellt wurden. Die Blots wurden mit Anti-Cytochrom C-Antikörpern untersucht. Es ist bekannt, dass Cytochrom C während der Apoptose vom Intermembranraum der Mitochondrien ins Zytosol transloziert wird, ein Prozess, der sich im Nachweis von Cytochrom C in der Zytosolfraktion apoptotischer Zellen widerspiegelt.
Spezifikationen
| Eigenschaften | Spezifikationen |
|---|---|
| applications | SDS-PAGE, Massenspektrometrie |
| fractionsisolated | Vier Fraktionen |
| startmaterial | Zelllysat |
| samplesize | ~5 x 10e6 Zellen |
| bindingcapacityyield | Variiert |
| species | Eukaryoten |
Ressourcen
Safety Data Sheets (1)
Kit Handbooks (2)
Technical Information (1)
Quick-Start Protocols (1)
Scientific Posters (1)
Certificates of Analysis (1)