REPLI-g Mitochondrial DNA Kit
对人类线粒体DNA进行高度均一的全基因组扩增
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特点
- 克服了分离线粒体DNA耗时的问题
- 从总DNA中选择性扩增线粒体DNA
- 扩增得到多达4 µg的高纯度线粒体DNA
产品详情
REPLI-g Mitochondrial DNA Kit可从DNA样本中选择性扩增线粒体DNA，无需预先分离线粒体DNA。该试剂盒含有DNA聚合酶、缓冲液和试剂，可利用MDA技术从少量样本中的总DNA中特异性、均一的扩增人类线粒体DNA。这一简便的操作可富集线粒体DNA，且细胞核DNA污染最小，避免进行耗时的线粒体DNA分离纯化，提高了下游分析的灵敏度。
绩效
总DNA中一般含有大约0.1%的线粒体DNA（如：1 ng人类总DNA含有1 pg线粒体DNA）。REPLI-g Mitochondrial DNA Kit可以特异性扩增人类线粒体全基因组，50 µl反应体系可扩增获得大约4 µg高纯度线粒体DNA。这相当于4000万倍的扩增效果，依据起始量会有所不同（参见" Enrichment of mitochondrial DNA"）。产物的平均长度一般长于10 kb。
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原理
常见的获得线粒体DNA的限制之一为需要将线粒体DNA与细胞核DNA分离，在需要提高线粒体DNA标记物分析的灵敏度时尤其如此。分离过程涉及很多耗时的步骤，有可能导致线粒体DNA的损失。REPLI-g Mitochondrial DNA Kit可在含有总DNA的样本中直接扩增获得线粒体DNA，解决了这一问题。
REPLI-g Mitochondrial DNA Kit可快速、高度均一的对线粒体基因组进行全基因组扩增。该方法基于MDA技术，采用新型独特进行性的DNA聚合酶进行等温基因组扩增。REPLI-g DNA Polymerase凭借其活跃的进行性置换反应，可扩增得到100 kb的DNA，无需预先分离DNA。与PCR扩增方法相比，这种方法能很大程度减小序列偏差和不均一位点的出现。
程序
使用REPLI-g Mitochondrial DNA Kit扩增线粒体DNA涉及两个基本的步骤（参见" Purified mitochondrial DNA procedure"）。首先，将含有总DNA的样本置于REPLI-g mt Reaction Buffer中75°C孵育五分钟，使其变性；通过冷却，使变性停止。然后，加入REPLI-g DNA Polymerase，在33°C开始恒温扩增8小时。
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应用
REPLI-g技术扩增获得的线粒体DNA可用于多种下游应用，包括：
- 基因分型（例如：SNP、缺失、插入）
- 终点式PCR、real-time PCR
- 测序
辅助数据和图表
Enrichment of mitochondrial DNA.
0.1 ng total DNA (representing approximately 15 cells) containing approximately 100 fg of mitochondrial DNA was amplified using the REPLI-g Mitochondrial DNA Kit. The total yield of mitochondrial DNA after amplification was up to 4 µg, corresponding to a 4 x 107-fold increase in mitochondrial DNA.
规格
| 特点 | 规格 |
|---|---|
| amplification | Whole genomic DNA |
| samplesperrunthroughput | Mid |
| denaturationstep | Heat |
| maximuminputvolume | 10 µl template DNA |
| minimalpipettingvolumeneeded | 1 µl |
| reactionvolume | 50 µl |
| reactiontime | ~8 hours (overnight) |
| qualityassessment | No |
| applications | Genotyping, sequencing, RFLP |
| startingamountofdna | ~10 ng purified total DNA |
| startingmaterial | Genomic human DNA |
| technology | Multiple Displacement Amplification (MDA) |
| yield | ~4 µg |
资源
Certificates of Analysis (1)