REPLI-g FFPE Kit
直接对福尔马林固定、石蜡包埋组织（FFPE）中的DNA进行全基因组扩增
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REPLI-g FFPE Kit (25)
目录编号 / ID. 150243
DNA Polymerase, Buffers, and Reagents for 25 x 50 μl whole genome amplification reactions
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Kit
REPLI-g FFPE Kit (25)
REPLI-g FFPE Kit (100)
REPLI-g FFPE Kit 旨在用于分子生物学应用。该产品不能用于疾病诊断、预防和治疗。
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特点
- 直接从石蜡切片中进行全基因组扩增
- 对FFPE组织中的DNA进行全基因组扩增
- 可扩展的标准化DNA产量：每个组织切片可达40 µg
- 简单快速的操作，快速获取结果
产品详情
如果基因组DNA量不足以进行基因组分析，这一问题可通过对样本内全基因组DNA扩增解决。REPLI-g FFPE Kit包含DNA聚合酶、新型缓冲液和试剂，确保对福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织进行高效的全基因组扩增，无需预先纯化DNA。组织切片裂解后，对DNA进行处理后进行DNA片段连接，然后使用REPLI-g技术扩增长链DNA。
绩效
提供两种实验方案，扩增时间不同。标准2小时扩增反应方案，每50 µl反应体系的常规产量为10 µg，高产量反应（8小时扩增）可得到40 µg产物。
原理
用于基因分型研究的基因组DNA量通常不足。全基因组扩增（WGA）通过在样本内扩增全基因组，克服了这个难题，可扩增获得足量的来源于同一样本的DNA用于后续分析。
对福尔马林固定、石蜡包埋的组织样本（FFPE）进行基因分型，可将组织的形态变化直接与特定基因组变异联系起来。但是，福尔马林固定会导致DNA片段化，并与样本内的其他生物分子发生交联。此外，从FFPE样本中纯化得到的DNA量较少，只能用于少数几个分析。
REPLI-g FFPE Kit利用新型的DNA处理技术，将DNA片段连接起来（参见" REPLI-g FFPE principle"）。然后通过经验证的REPLI-g技术对随机连接起来的DNA进行全基因组扩增。REPLI-g产品应与MDA以及独特的DNA聚合酶结合使用。REPLI-g DNA Polymerase凭借其活跃的进行性酶反应和单链置换反应，可很大程度上减少序列偏差和不均一位点的出现。该方法得到的结果比基于PCR的WGA方法更加可靠。新型的DNA处理技术可将MDA技术充分利用在FFPE组织样本中高度降解的DNA上。REPLI-g FFPE Kit在位点不变化的同时，实现对珍贵样本材料中DNA的扩增，产物可用于多种下游应用。
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程序
REPLI-g FFPE可使用FFPE组织样本直接进行DNA扩增，无需预先纯化DNA。裂解组织切片后，使用新型缓冲液和酶处理DNA，将片段化的DNA连接起来（参见" REPLI-g FFPE procedure"和" High-molecular-weight ligated DNA"）。反应后生成DNA长链，长链经REPLI-g技术扩增。扩增得到的DNA可即用于多数基因分型下游应用，无需进行纯化。
使用REPLI-g FFPE Kit扩增得到的DNA适用于real-time PCR（如使用QuantiFast Kits）和终点式PCR（如使用QIAGEN Fast Cycling PCR Kit）。PCR扩增子应比起始模板的平均片段长度短。还适用于微卫星分析（参见" Reliable microsatellite analysis"）和SNP基因分型（REPLI-g FFPE扩增得到的DNA可能不适用于需要限制性内切进行DNA标记的基因分型应用）。
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应用
REPLI-g FFPE扩增的DNA适合以下应用：
- Real-time PCR
- 终点式PCR
- SNP基因分型
- 微卫星分析
辅助数据和图表
REPLI-g FFPE procedure.
Formalin fixation and paraffin embedding cause DNA fragmentation. During the REPLI-g FFPE procedure, these DNA fragments are randomly ligated and then amplified using multiple displacement amplification. As indicated, DNA fragments (containing different loci [L1–L4]) are not assembled in the original order. However, the different loci are equally amplified and can be detected in downstream genotyping applications.
规格
| 特点 | 规格 |
|---|---|
| yield | 10 µg (2h reaction)-40 µg (8h reaction) |
| qualityassessment | No |
| startingmaterial | FFPE tissue sections or purified genomic DNA |
| technology | MDA |
| maximuminputvolume | 1 tissue section (10-40 µm thickness) |
| reactiontime | 2-8h (2h: standard; 8h: high-yield reaction) |
| reactionvolume | 50 µl |
| startingamountofdna | 100-300 ng* |
| applications | Genotyping, PCR, Real-time PCR |
| samplesperrunthroughput | medium |
| amplification | Whole genomic DNA |
资源
产品介绍与指南 (4)
学术海报 (4)
试剂盒操作手册 (1)
白皮书 (1)
安全数据表 (1)
补充实验方案 (1)
应用说明 (2)
其他资源 (1)
快速启动实验方案 (1)
Certificates of Analysis (1)
文献
Genome-wide DNA methylation analysis of archival formalin-fixed paraffin-embedded tissue using the Illumina Infinium HumanMethylation27 BeadChip.
Methods; 2010; 52 (3):248-54 2010 Apr 29 PMID:20434562
Whole genome amplification for array comparative genomic hybridization using DNA extracted from formalin-fixed, paraffin-embedded histological sections.
J Mol Diagn; 2009; 11 (2):109-16 2009 Feb 5 PMID:19197000