QuantiFast Pathogen +IC Kits

• 병원체 표적과 내부 대조물질 동시 검출
• 더 많은 샘플 투입이 가능한 더 뛰어난 민감도의 5x 마스터 믹스
• 프로세스 안전성 향상을 위한 음성 결과의 정확한 해석
• 약한 양성 표적 신호의 명확한 검출
• 표준 및 고속 사이클러 모두에서 빠르고 범용적인 프로토콜 지원

QuantiFast Pathogen +IC Kits는 서열 특이적 프로브를 사용하여 병원체 핵산의 민감하고 신속한 real-time PCR 또는 원스텝 RT-PCR 검출을 위해 고안되었습니다. 음성 검출 결과의 정확한 해석을 통한 뛰어난 프로세스 안전성을 위해 각 키트에는 최대 4개의 사용자 지정 병원체 표적(예: 바이러스, 박테리아, 곰팡이 등)을 실시간 멀티플렉스 검출할 수 있는 시약과 내부 대조물질(Internal Control, IC) 시약이 포함되어 있습니다. 두 가지 키트 형식이 있습니다. 내부 RNA 대조물질 템플릿이 포함된 바이러스 RNA 검출용 QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit와 내부 대조물질 프라이머/프로브 세트 또는 내부 DNA 대조물질 템플릿이 포함된 바이러스, 박테리아, 곰팡이 DNA 검출용 QuantiFast PCR +IC Kit와 내부 대조물질 프라이머/프로브 세트입니다. 두 키트 모두 농도가 다른 ROX가 2개의 튜브에 담겨 제공되므로 거의 모든 real-time기기에서 사용할 수 있습니다. 편의를 위해 마스터 믹스는 2~8°C에서 보관할 수 있습니다.

QuantiFast Pathogen +IC Kits는 멀티플렉싱 시 민감도 손실 없이 넓은 선형 범위에서 바이러스 RNA 또는 DNA 표적과 제공된 내부 대조물질을 동시에 검출할 수 있습니다(그림  Rotor-Gene Q에서의 노로바이러스 고감도 검출 및  싱글플렉스 및 듀플렉스 검출의 높은 선형성 및 정밀도 참고). 이 프로토콜은 대부분의 사이클러에서 고속 사이클링 실험을 높은 신뢰도로 실행할 수 있도록 개발되었습니다(그림 ' Rotor-Gene Q에서 BHV-1의 고감도 검출' 및 ' ABI 7500에서 BHV-1의 고감도 검출' 참고). QuantiFast Pathogen +IC Kits를 사용하여 병원체 표적을 증폭하고 내부 대조물질을 함께 사용하면 음성 결과의 올바른 해석을 보장하여 병원체 검출 워크플로우의 프로세스 안전성이 향상됩니다(그림 ' 음성 결과의 정확한 해석' 참고).

키트와 함께 제공되는 QuantiTect 핵산 희석 완충액은 희석 및 반응 셋업 중에 RNA 및 DNA 표준물질을 안정화시키고 튜브나 피펫 팁과 같은 플라스틱 표면에서 핵산의 손실을 방지합니다. 바이러스 핵산을 정량화하는 데 사용되는 표준물질을 안정적으로 희석하여 낮은 C_T 값부터 높은 C_T 값까지 넓은 선형 범위를 제공합니다. 완충액은 품질 저하 없이 표준물질을 더 오래 보관할 수 있게 해줍니다(그림 ' RNA 표준물질의 안정적인 희석 및 보관' 참고).

음성 결과의 정확한 해석을 통해 프로세스 안전성을 높이기 위해, 각 QuantiFast Pathogen _IC Kit에는 내부 대조물질을 통해 사용자 지정 병원체 표적을 멀티플렉스로 실시간 검출할 수 있는 시약이 포함되어 있습니다. 대조물질과 표적 유전자를 별도의 반응이 아닌 동일한 반응에서 증폭하면 취급 오류를 최소화하여 유전자 정량화의 신뢰성을 높일 수 있습니다.

QuantiFast Pathogen +IC Kits를 통해 한 번의 시도로 병원체 핵산을 민감하고 신속하게 real-time 멀티플렉스 PCR 또는 원스텝 RT-PCR로 검출할 수 있습니다(순서도 ' QIAGEN 멀티플렉스 키트' 참고). 최적화된 마스터 믹스는 멀티플렉스 반응의 PCR 생성물이 대응하는 단일 증폭 반응의 PCR 산물과 동일한 효율과 민감도로 증폭되도록 보장합니다. 특별히 개발된 고속 PCR 완충액에는 변성, 어닐링 및 연장 시간을 크게 줄여주는 새로운 첨가제 Q-Bond가 함유되어 있습니다(그림 ' 고속 프라이머 어닐링' 참고). K⁺ 및 NH₄⁺ 이온의 균형 잡힌 조성과 독자적인 합성 인자 MP는 프라이머와 프로브를 핵산 템플릿에 안정적이고 효율적으로 어닐링하여 높은 PCR 효율을 가능하게 합니다(그림  독자적인 PCR 완충액 참고). 또한 Sensiscript 역전사 효소의 독자적인 배합으로 바이러스 RNA의 고감도 역전사를 보장하며, HotStarTaq Plus DNA Polymerase는 엄격한 hot start를 제공하여 비특이적 생성물의 형성을 방지합니다.

QuantiFast Pathogen +IC Kits는 사용자 지정 병원체 및 내부 대조물질 검출을 위한 간단한 절차를 제공합니다. 여기에는 바이러스 RNA(원스텝 RT-PCR) 또는 바이러스, 박테리아, 곰팡이 DNA(PCR)의 실시간 검출을 위한 즉시 사용 가능한 마스터 믹스가 포함되어 있습니다. 반응 및 사이클링 조건을 최적화할 필요가 없습니다. 제공된 마스터 믹스를 병원체 분석(프라이머 및 프로브), 제공된 내부 대조군 분석 및 내부 대조군 DNA 또는 RNA와 혼합하기만 하면 됩니다. 또는 샘플 정제 절차에 내부 대조물질을 추가한 경우, 반응 혼합물에 내부 대조물질 DNA 또는 RNA 대신 RNase 불포함수를 첨가합니다. 그런 다음 샘플 DNA 또는 RNA를 추가하고 사이클러에서 반응을 시작합니다. 키트 안내서에는 다양한 사이클러에서 TaqMan® 프로브와 함께 사용할 수 있도록 최적화된 프로토콜이 포함되어 있습니다. 또한 염료 조성 선택에 대한 권장 사항도 포함되어 있습니다.

각 QuantiFast Pathogen +IC Kit에는 반응 혼합물에 직접 추가하여 증폭 대조군으로 사용할 수 있는 내부 대조군 분석과 내부 대조군 DNA 또는 RNA가 함유되어 있습니다. 또는 IC를 정제 절차에 추가하여 정제 과정과 증폭을 모두 대조 관리할 수 있습니다. 정제 절차에 내부 대조물질을 추가하기 위해 고농축 내부 대조물질 DNA 또는 RNA(고농도)를 별도로 주문할 수 있습니다(그림 ' QIAGEN 내부 대조물질' 참고).

QuantiFast Pathogen +IC Kits는 내부 대조물질을 포함한 병원체 DNA 및/또는 RNA를 검출하기 위해 서열 특이적 프로브를 사용하여 민감한 real-time PCR 또는 원스텝 RT-PCR을 제공합니다. 이 키트는 QIAGEN, Applied Biosystems, Bio-Rad, Roche(capillary 사이클러 제외), Agilent의 사이클러를 포함한 다양한 real-time 사이클러에서 사용할 수 있습니다.