QuantiFast Pathogen + IC Kits

• 病原体ターゲットと内部コントロールを同時検出
• より多くのサンプルインプットでより高い感度が得られる5xマスターミックス
• プロセス安全性を高める陰性結果の正しい解釈
• 弱い陽性ターゲットシグナルを明確に検出
• 標準サイクラーと高速サイクラーの両方で、迅速なユニバーサルプロトコール

QuantiFast Pathogen +IC Kitsは、配列特異的プローブを使用して、病原体核酸を高感度で迅速に、リアルタイムPCRまたは1ステップRT-PCR検出ができるように設計されています。陰性検出結果を正しく解釈することで高いプロセス安全性を可能にするため、各キットには最大4つのユーザー定義の病原体ターゲット（ウイルス、細菌、真菌など）とInternal Control（IC）のマルチプレックスリアルタイム検出を行う試薬が含まれています。キットには2つの形式があります。ウイルスRNA検出用のQuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit（内部RNAコントロールテンプレートとInternal Controlプライマー/プローブセットを含む）、またはウイルス、細菌、真菌DNA検出用のQuantiFast Pathogen PCR +IC Kit（内部DNAコントロールテンプレートとInternal Controlプライマー/プローブセットを含む）です。どちらのキットでも、ROXは濃度の異なる2本のチューブで提供され、事実上どのリアルタイムPCR装置でも使用できます。マスターミックスは2～8℃で保存できるので便利です。

QuantiFast Pathogen +IC Kitsは、マルチプレックス時に感度を損なうことなく、広い直線範囲にわたってウイルスRNAまたはDNAターゲットと付属のInternal Controlを同時に検出できます（図 Rotor-Gene Qでのノロウイルスの高感度検出および シングルプレックスおよびデュプレックス検出の高い直線性と精度参照）。このプロトコールは、ほとんどのサイクラーで、高速サイクリング実験を高い信頼性で実行できるように開発されています（図「 Rotor-Gene QでのBHV-1の高感度検出」および「 ABI 7500でのBHV-1の高感度検出」参照）。QuantiFast Pathogen +IC Kitsを使用して病原体ターゲットとInternal Controlを組み合わせて増幅すると、陰性結果の正しい解釈が保証され、病原体検出ワークフローのプロセス安全性が向上します（図「 陰性結果の正しい解釈」参照）。

キットに付属するQuantiTect Nucleic Acid Dilution Bufferは、希釈および反応セットアップ中にRNAおよびDNAスタンダードを安定化し、チューブやピペットチップのようなプラスチック表面での核酸の損失を防ぎます。ウイルス核酸定量に使用する標準の信頼性の高い希釈を可能にし、低～高C_T値の広い直線範囲が得られます。このバッファーは、変性することなくスタンダードを長期保存できます（図「 信頼性の高いRNA標準の希釈と保存」参照）。

陰性結果を正しく解釈することで高いプロセス安全性を可能にするため、各QuantiFast Pathogen _IC Kitには、ユーザー定義の病原体ターゲットとInternal Controlをマルチプレックスでリアルタイム検出するための試薬が含まれています。コントロール遺伝子と標的遺伝子を別々の反応ではなく、同じ反応で増幅することで、ハンドリングエラーが最小限に抑えられ、遺伝子定量の信頼性が向上します。

QuantiFast Pathogen +IC Kitsは、病原体核酸の高感度かつ迅速なリアルタイムマルチプレックスPCRまたは1ステップ RT-PCR検出を最初の試みで実現します（フローチャート「 QIAGENマルチプレックスキット」参照）。最適化されたマスターミックスは、マルチプレックス反応時にPCR産物が、対応するシングル増幅反応時のPCR産物と同じ効率と感度で増幅されることを保証します。特別に開発された高速PCRバッファーには、変性、アニーリング、伸長時間を大幅に短縮する新しい添加剤Q-Bondが含まれています（図「 高速プライマーアニーリング」参照）。K⁺イオンとNH₄⁺イオンのバランスのとれた組み合わせと独自の合成Factor MPにより、プライマーとプローブの核酸テンプレートへの安定的かつ効率的なアニーリングが促進され、高いPCR効率が可能になります（図「 独自のPCRバッファー」参照）。さらに、Sensiscript Reverse Transcriptaseの独自の組成により、ウイルスRNAの高感度逆転写が保証され、HotStarTaq Plus DNA Polymeraseにより厳密なホットスタートが提供され、非特異的産物の形成が防止されます。

QuantiFast Pathogen +IC Kitsは、ユーザー定義の病原体とInternal Controlを検出するための簡便な手順を提供します。キットには、ウイルスRNA（1ステップRT-PCR）またはウイルス、細菌、真菌DNA（PCR）をリアルタイムで検出するための、すぐに使用できるマスターミックスが含まれています。反応条件やサイクリング条件を最適化する必要はありません。付属のマスターミックスと病原体アッセイ（プライマーとプローブ）、付属のInternal Control AssayとInternal Control DNAまたはRNAを混合するだけです。あるいは、サンプル精製手順にInternal Controlを加える場合は、Internal Control DNAまたはRNAの代わりにRNaseフリー水を反応ミックスに加えます。その後、サンプルDNAまたはRNAを加え、任意のサイクラーで反応を開始します。キットのハンドブックには、さまざまなサイクラーでTaqMan®プローブを使用することができるように最適化されたプロトコールが含まれています。また、色素の組み合わせの選択に関する推奨事項も記載されています。

各QuantiFast Pathogen +IC Kitには、反応ミックスに直接添加して増幅コントロールとして使用するためのInternal Control AssayとInternal Control DNAまたはRNAが含まれています。あるいは、ICを精製手順に追加して、精製プロセスと増幅の両方をコントロールすることもできます。精製手順にInternal Controlを追加するには、高濃度のInternal Control DNAまたはRNA（高濃度）を別途注文できます（図「 QIAGEN Internal Control」参照）。

QuantiFast Pathogen +IC Kitsは、内部コントロールを含む病原体DNAおよび/またはRNAの検出に配列特異的プローブを使用する高感度real-time PCR または1ステップRT-PCR を提供します。このキットは、QIAGEN、Applied Biosystems、Bio-Rad、Roche（キャピラリーサイクラーを除く）、Agilentのサイクラーを含む幅広いリアルタイムPCRサイクラーで使用できます。