HotStarTaq Master Mix Kit
どのようなPCRアプリケーションでも特異性の高い増幅を実現
商業用のバルク製品、カスタマイズ製品、最適化された製品が必要ですか？ QIAGENでは、ロジスティクスやコンプライアンスなどのサポートも行っています。QIAGEN Strategic Partnerships & OEMにお問い合わせください。
HotStarTaq Master Mix Kit (250 U)
カタログ番号 / ID. 203443
3 x 0.85 ml HotStarTaq Master Mix (contains 250 units HotStarTaq DNA Polymerase, PCR Buffer with 3 mM MgCl2, and 400 µM of each dNTP)and 2 x 1.7 ml RNase-Free Water
単位
250 U
1000 U
2500 U
HotStarTaq Master Mix Kitは分子生物学的アプリケーション用であり、疾病の診断、予防、あるいは治療に使用することはできません。
商業用のバルク製品、カスタマイズ製品、最適化された製品が必要ですか？ QIAGENでは、ロジスティクスやコンプライアンスなどのサポートも行っています。QIAGEN Strategic Partnerships & OEMにお問い合わせください。
特徴
- 至適化なしに高いPCR特異性を実現
- 反応セットアップが室温で可能
- 即使用可能なマスターミックスフォーマットでピペッティング操作が減少
製品詳細
HotStarTaq Master Mixには、HotStarTaq DNA Polymerase、至適化が最小限で済む画期的なQIAGEN PCR Buffer、およびdNTPが含まれています。マスターミックスには全ての成分が含まれているので、ピペッティングステップとコンタミのリスクが減少し、スループット数と再現性が増加します。
パフォーマンス
HotStarTaq Master Mix Kitは全てのロットで、低コピー数のターゲットを増幅する実験によりPCR特異性の厳密さや再現性をチェックするなど、広範囲の品質管理テストを受けています。HotStarTaq Master Mix Kitは他社のキットに比べて高性能で、特異性と感度の高いホットスタートPCRを実現します（図" Higher specificity with different primer–template systems異なるプライマー／テンプレートシステムにおける高特異性"、" 卓越した性能 " および表）。キットに付属の画期的なPCRバッファーは、様々なPCR条件において特異性を実現し、至適化は最小限に抑えられます（図 " 幅広い至適アニーリング温度" および" 異なったマグネシウム濃度への適応"）。
高い特異性と簡便な操作を実現するHotStarTaq Master Mix Kitは、複雑なゲノムテンプレートあるいはcDNAテンプレート（図“ RT-PCR性能へのホットスタートの影響”）、複数のプライマーペア（図“ Multiplex PCRにおける特異的な増幅”）、増幅困難なサンプルあるいは低コピーのターゲット（図“ 高感度のシングルセルPCR”）などとの使用に適しています。これはまた、遺伝子スクリーニングのような多数サンプルを増幅するプロジェクトに最適です。
| HotStarTaq DNA Polymerase | ホットスタート酵素AII社 | 抗体利用 | マニュアル | ワックスバリア | |
|---|---|---|---|---|---|
| 特異的な増幅 | ++ | + | + | +/– | +/– |
| PCR至適化の不要性 | ++ | +/– | +/– | – | – |
| 取り扱いの簡便さ | ++ | ++ | + | – | – |
HotStarTaq DNA Polymerase 詳細データ
濃度：5 units/µl
組み換え酵素：Yes
基質アナログ：dNTP、ddNTP、dUTP、biotin-11-dUTP、DIG-11-dUTP、 fluorescent-dNTP/ddNTP
エクステンション速度：72℃ で2～4 kb/min
半減期：97℃で10分、94℃で60分
増幅効率：≥105 倍
5'–>3' エキソヌクレアーゼ活性：Yes
余分なA付加：Yes
3'–>5' エキソヌクレアーゼ活性：No
ヌクレアーゼの混入：No
RNasesの混入：No
プロテアーゼの混入：No
自己プライマー活性：No
図参照
原理
HotStarTaq Master Mixは即使用可能なマスターミックスで、HotStarTaq DNA Polymerase、QIAGEN PCR Buffer、dNTPsが入っています。Taq DNA Polymeraseを修飾したHotStarTaq DNA PolymeraseはホットスタートPCR において高い特異性を実現します。
HotStarTaq DNA Polymerase
HotStarTaq DNA Polymeraseは、常温では不活性状態でポリメラーゼ活性はありません。この特性により、PCR セットアップや最初のPCR サイクル中の低温での非特異的なプライマーのアニーリングやプライマーダイマーの形成を回避できます（図" ホットスタートPCRで最高のパフォーマンスを実現"および"異なるプライマー／テンプレートシステムにおける高特異性"）。HotStarTaq DNA Polymeraseは、95℃、15 分間のインキュベーションステップで活性化され、このステップは既存のサーマルサイクリングのプログラムに容易に導入できます。
QIAGEN PCR Buffer
QIAGEN PCR Buffer は、各PCRサイクルでアニーリングステップ中にプライマー特異的な結合の割合を非特異的な結合に対して高めることにより、各PCRサイクルの特異的な増幅を維持します（図“ プライマーのアニーリングの特異性増大”）。このバッファーはユニークな配合比のKClと (NH4)2SO4を含み、従来のPCRバッファーに比べ、幅広いアニーリング温度やMg2+濃度の範囲で厳密で特異的なプライマーアニーリングを実現します。従って、異なるアニーリング温度あるいはMg2+濃度を用いて行なうPCRの至適化は最小限ですみ、または不要なこともあります（図 " 幅広い至適アニーリング温度"および" 異なったマグネシウム濃度への適応"）。
図参照
操作手順
HotStarTaq Master Mix Kitは簡便なマスターミックスフォーマットですので、操作は容易です。HotStarTaq DNA Polymeraseは、95℃、15 分間のインキュベーションステップで活性化され、このステップは既存のサーマルサイクリングのプログラムに容易に導入できます。マスターミックスを用いて、反応セットアップを室温で迅速かつ容易に行なえます。 25 µlのHotStarTaq Master Mixを各PCRチューブにピペットでいれ、RNaseフリー水（キットに付属）で希釈したプライマーとテンプレートDNAを25 µl添加します（図" HotStarTaq操作手順"）。ピペッティングステップは最小限に抑えられ、エラーとコンタミのリスクが減少し、スループット数と再現性が増加します。キットに付属の至適化済みのプロトコールにより、PCRセットアップを迅速かつ容易に行なえます。
図参照
アプリケーション
HotStarTaq Master Mix Kitは、増幅などの高度なアプリケーションを含む様々なアプリケーションに最適です：
- 複雑なゲノムテンプレート
- 複雑なcDNAテンプレート（例；RT-PCR）
- 低コピーのターゲット（例；シングルセルPCR）
- マルチプレックスPCR
裏付けデータと数値
HotStarTaq procedure.
The HotStarTaq procedure is fast and easy for maximum convenience.
仕様
| 特徴 | 仕様 |
|---|---|
| applications | PCR, RT-PCR, Complex genomic templates, very low-copy targets |
| realtimeorendpoint | Endpoint |
| mastermix | Yes |
| enzymeactivity | 5'-> 3' exonuclease activity |
| sampletargettype | Genomic DNA and cDNA |
| singleormultiplex | Single |
| reactiontype | PCR amplification |
| withwithouthotstart | With hotstart |
リソース
クイックスタートプロトコール (1)
User-Developed Protocols (1)
キットハンドブック (1)
パンフレット (4)
MSDS (1)
テクニカルインフォメーション (1)
Certificates of Analysis (1)
出版物
Rapid detection of point mutations conferring resistance to fluoroquinolone in gyrA of Helicobacter pylori by allele-specific PCR.
J Clin Microbiol; 2006; 45 (2):303-5 2006 Nov 22 PMID:17122023
Quantitative detection of DNA methylation states in minute amounts of DNA from body fluids.
Methods; 2010; 52 (3):242-7 2010 Apr 1 PMID:20362673
Quantitative PCR-based approach for rapid phage display analysis: a foundation for high throughput vascular proteomic profiling.
Physiol Genomics; 2006; 26 (3):202-8 2006 May 16 PMID:16705020
Megalin-dependent internalization of cadmium-metallothionein and cytotoxicity in cultured renal proximal tubule cells.
J Pharmacol Exp Ther; 2006; 318 (2):782-91 2006 May 11 PMID:16690719
Cytochrome P450 gene induction in rats ex vivo assessed by quantitative real-time reverse transcriptase-polymerase chain reaction (TaqMan).
Drug Metab Dispos; 2006; 34 (6):1063-9 2006 Mar 10 PMID:16531474