QuantiTect PCR Kits

• 저카피 표적의 고감도 검출
• 서열 특이적 프로브 또는 SYBR Green을 사용한 qPCR
• 템플릿의 여러 로그에 대한 정확한 정량화
• 반응 및 사이클링 조건 최적화 필요 없음
• 같은 튜브에서 최대 5개의 표적 검출

QuantiTect PCR Kits(qPCR 키트)를 사용하면 서열 특이적 프로브 또는 SYBR Green I 검출을 사용하는 real-time PCR 및 투스텝 RT-PCR을 통해 gDNA 및 cDNA 표적을 민감하게 정량화할 수 있습니다. 또한 이 real-time PCR 키트를 사용하면 멀티플렉스, real-time PCR 또는 투스텝 RT-PCR을 통해 단일 튜브에서 최대 5개의 gDNA 또는 cDNA 표적을 안정적으로 정량화할 수 있습니다. 즉시 사용 가능한 마스터 믹스에 hot start와 독자적인 PCR 완충액 시스템을 결합하여 최적화할 필요 없이 모든 real-time 사이클러에서 고감도 qPCR을 보장합니다. dNTP 혼합물에는 dUTP가 포함되어 있어 선택 사항으로 UNG로 처리할 수도 있습니다. 편의를 위해 QuantiTect PCR Kits의 마스터 믹스는 2~8°C에서 보관할 수 있습니다.

서열 특이적 프로브를 사용하는 멀티플렉스 PCR에는 두 가지 키트 형식이 있습니다. 형광 정규화를 위해 ROX 염료가 필요한 사이클러용 QuantiTect Multiplex PCR Kit와 다른 모든 사이클러용 QuantiTect Multiplex PCR NoROX Kit가 그것입니다.

QuantiTect 정량 PCR 키트에 포함된 HotStarTaq DNA Polymerase는 다른 중합효소에 비해 매우 엄격한 hot start를 제공하여 PCR 반응의 특이성을 높입니다.

QuantiTect SYBR Green PCR Kits를 사용하면 넓은 선형 범위에서 특이적 정량화가 가능합니다(그림 ' 넓은 선형 범위에 걸친 특이적 정량화' 참고). QuantiTect SYBR Green PCR Kits를 QuantiTect Reverse Transcription Kit 및 QuantiTect Primer Assays와 함께 사용하면 민감하고 신뢰할 수 있는 결과를 제공합니다(그림 ' 특이적이고 민감한 정량화' 참고).

QuantiTect Probe PCR Kits는 QuantiTect Reverse Transcription Kit와 함께 민감하고 신뢰할 수 있는 결과를 제공합니다(그림 ' 높은 민감도와 효율성 및 넓은 동적 범위' 참고). QuantiTect Probe PCR Kits는 독자적인 PCR 완충액 구성을 통해 저카피 DNA 표적의 민감한 정량화는 물론 넓은 선형 범위에서 정확한 정량화를 제공합니다(그림 ' real-time PCR의 넓은 동적 범위' 참고).

QuantiTect Multiplex PCR 마스터 믹스는 멀티플렉스 반응의 PCR 생성물이 대응하는 단일 증폭 반응의 PCR 생성물과 동일한 효율과 민감도로 증폭되도록 보장합니다(표 “트리플렉스 및 싱글플렉스 PCR에서의 유사한 수준의 임계 사이클(C_Τ) 값”, 그림 “ 4-플렉스 및 싱글플렉스 PCR에서의 유사한 결과” 참고).

동일한 반응에서 참조 유전자의 복제수가 최대 10⁶배 더 많더라도 키트로 10카피의 표적 유전자까지 검출할 수 있습니다(그림 “ 과잉 참조 유전자 존재 시에도 표적 유전자 10카피 검출' 및 해당하는 표 '저함량 또는 고함량 표적에 대한 성공적인 정량 트리플렉스 qPCR' 참고).

QuantiTect SYBR Green PCR Kits에는 SYBR Green I을 사용하여 cDNA 표적을 매우 특이적이고 민감하게 실시간 정량화할 수 있도록 최적화된 마스터 믹스가 즉시 사용 가능한 상태로 포함되어 있습니다(표 “2x QuantiTect SYBR Green PCR Kit의 구성품” 참고). 마스터 믹스에 함유된 형광 염료 SYBR Green I을 사용하면 표적 특이적으로 라벨링된 프로브를 합성할 필요 없이 다양한 표적을 분석할 수 있습니다. PCR 완충액 내 K⁺ 이온과 NH₄⁺ 이온의 균형 잡힌 조성은 특이적 프라이머 어닐링을 촉진하고 높은 PCR 특이성과 민감도를 가능하게 합니다(그림 '특이적 프라이머 어닐링' 참고). 또한 HotStarTaq DNA Polymerase는 엄격한 hot start를 제공하여 비특이적 생성물의 형성을 방지합니다.

QuantiTect Probe PCR Kits에는 서열 특이적 프로브를 사용하여 gDNA 및 cDNA 표적을 매우 특이적이고 민감하게 실시간 정량화하는 최적화된 마스터 믹스가 즉시 사용 가능한 상태로 포함되어 있습니다(표 “2x QuantiTect Probe PCR Kit의 구성품” 참고). 이 키트는 가수분해 프로브 검출(예: TaqMan® 및 기타 이중 라벨링된 프로브), FRET 프로브, Molecular Beacon을 포함한 모든 유형의 서열 특이적 프로브와 함께 사용하도록 고안되었습니다. QuantiTect Probe PCR Kits에는 특이적 프라이머 어닐링을 촉진하는 K⁺ 및 NH₄⁺ 이온의 균형 잡힌 조합이 함유된 독자적인 PCR 완충액이 포함되어 있어 높은 PCR 특이성과 민감도를 가능하게 합니다(그림 '특이적 프라이머 어닐링' 참고). 또한 HotStarTaq DNA Polymerase는 엄격한 hot start를 제공하여 비특이적 생성물의 형성을 방지합니다.

QuantiTect Multiplex PCR Kits를 사용하면 한 번의 시도로 멀티플렉스 투스텝 RT-PCR에 성공할 수 있습니다(순서도 ' QIAGEN 멀티플렉스 키트' 참고). 최적화된 마스터 믹스는 멀티플렉스 반응의 PCR 생성물이 대응하는 단일 증폭 반응의 PCR 산물과 동일한 효율과 민감도로 증폭되도록 보장합니다. 키트를 사용하면 10카피의 표적 유전자까지 검출할 수 있습니다.

참조 유전자와 표적 유전자를 개별 반응이 아닌 같은 반응에서 증폭하면 조작 오류를 최소화하여 유전자 정량화의 신뢰성을 높일 수 있습니다. QuantiTect Multiplex PCR 마스터 믹스에는 K⁺ 및 NH₄⁺ 이온의 균형 잡힌 조합과 독자적인 합성 인자 MP가 포함되어 있어 프라이머와 프로브를 핵산 템플릿에 안정적이고 효율적으로 어닐링하여 높은 PCR 효율을 제공합니다(표 '2x QuantiTect Multiplex PCR Kit의 구성품' 참고). 또한 HotStarTaq DNA Polymerase는 엄격한 hot start를 제공하여 비특이적 생성물의 형성을 방지합니다.

QuantiTect PCR Kits의 마스터 믹스에는 dUTP도 함유되어 있어 PCR을 시작하기 전에 우라실-N-글라이코실레이스(Uracil-N-Glycosylase, UNG)로 전처리할 수 있으므로 오염된 PCR 생성물이 후속 PCR 반응에 영향을 주지 않도록 보장합니다.

필요한 경우, 우라실-N-글라이코실레이스(Uracil-N-Glycosylase, UNG)로 반응을 전처리하여 이전 반응에서 나온 PCR 생성물의 캐리오버를 제거할 수 있습니다. Real-time 투스텝 RT-PCR에서 최적의 결과를 얻으려면 QuantiTect Reverse Transcription Kit를 사용한 cDNA 합성을 추천합니다. 이 키트는 유전체 DNA 오염을 통합 제거하여 단 20분 만에 빠르게 cDNA를 합성할 수 있습니다.

QuantiTect SYBR Green 및 Probe PCR Kits는 지루하고 시간이 많이 소요될 수 있는 반응 조건 최적화의 필요성을 없애줍니다. 즉시 사용 가능한 PCR 마스터 믹스에 프라이머와 DNA 템플릿을 추가하고 반응을 시작하기만 하면 됩니다. 모든 real-time 사이클러에서 빠르고 안정적인 결과를 얻으려면 안내서의 프로토콜을 따르십시오.

QuantiTect SYBR Green PCR Kits를 QuantiTect Primer Assay와 함께 사용하면 유전자 발현 분석에서 매우 특이적인 결과를 보장할 수 있습니다. 이들은 사람, 마우스, 래트(rat) 및 기타 여러 종의 전사체를 검출하기 위해 유전체 전체에 걸쳐 생물정보학적으로 검증된 프라이머 세트입니다. QuantiTect Primer Assay는 GeneGlobe에서 온라인으로 쉽게 주문할 수 있습니다.

QuantiTect Multiplex PCR Kits에는 반응 및 사이클링 조건을 최적화할 필요가 없는 즉시 사용 가능한 마스터 믹스가 포함되어 있습니다. 안내서에는 사용 가능한 모든 real-time 사이클러에서 사용할 수 있는 단일 프로토콜이 포함되어 있으며 권장 염료도 기재되어 있습니다.

키트는 마스터 믹스에 ROX 패시브 기준 염료를 추가하거나 추가하지 않고도 사용할 수 있으므로 거의 모든 real-time 사이클러에서 사용할 수 있습니다(표 “올바른 QuantiTect Multiplex PCR Kit 선택하기” 참고). ROX 농도가 최적화되어 있어 자동 데이터 분석을 통해 적은 복제수까지도 검출할 수 있습니다.

QuantiTect PCR Kits는 cDNA의 유전자 발현 분석 또는 gDNA 정량화를 위해 모든 real-time 사이클러에서 사용할 수 있습니다. 여기에는 Applied Biosystems, Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, Roche, Agilent의 기기가 포함됩니다. Rotor-Gene Q 및 기타 Rotor-Gene 사이클러의 경우, 이러한 기기에서 빠른 사이클링을 위해 특별히 개발된 Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit, Rotor-Gene Probe PCR Kit 또는 Rotor-Gene Multiplex PCR Kit를 사용할 것을 권장합니다.