QIAseq miRNA Library Kit

最適化された反応は、反応バイアスを最小限に抑え、アダプターダイマーを排除しながら、確実なmiRNA特異的ライブラリー調製を可能にします。 Unique Molecular Indices（UMI）は反応初期段階で各miRNAをタグ付けし、PCRおよびシーケンシングバイアスを排除します。 GeneGlobeを介した無料の統合されたデータ解析により、miRNAマッピングとUMI解析、および差次的発現解析が可能です。

QIAseq miRNAシークエンシングにより、改善されたワークフローにより優れたデータ生成が可能です。 標準的なQIAseq miRNA法は、ゲル精製・切り出しおよび溶出を必要とせず、サンプル損失を防ぎ、処理時間を短縮します。

miRNAシーケンシングの大きな問題は、アダプターダイマーの混入があることです。 QIAseq miRNA Library Kitは完全に最適化されたライブラリープロセスを採用し、非常に低いtotal RNA量でもアダプターダイマーを実質的に排除します（ アダプターダイマー（AD）と汚染RNAがmiRNAseq実験のリードを妨害を参照）。 さらに反応は、確実なmiRNA作製に焦点を絞り、バイアスとバックグラウンドの混入を排除します。 これらの利点により、QIAseq miRNA Library Kitは、シーケンスに利用可能なmiRNAの収量を最大化することができます。

QIAseq miRNA Library Kitは、潜在的なバイオマーカーとしての循環型miRNAに対応するために、低入力レベルにまでmiRNAをマッピングできるように最適化されています。 さらに、逆転写プロセス中にUnique Molecular Indices（UMI）を導入し、NGSによる成熟miRNAの不均一かつ正確なmiRNome全体定量を可能にします。 QIAseq miRNAは、次世代シークエンシングを使用して、差次的発現解析と新規miRNA発見のための比類のないSample to Insightソリューションを提供します（ QIAseq miRNAワークフローを参照）。

成熟miRNAは、転写後遺伝子調節を仲介する、天然の22ヌクレオチドのnon-coding RNAです。 miRNAの改変は、発生、分化、シグナル伝達、感染、老化および疾患における遺伝子発現の変化と相関します。血清、血漿、脳脊髄液（CSF）および尿を含むすべての生体液中で発現されるmiRNAとして、循環miRNAと正常および疾患生物学を関連付ける証拠が継続的に報告されています。特に癌においては、多くの研究とレビューが、様々なmiRNAの存在と癌細胞増殖、アポトーシスに対する抵抗性、侵襲性および分化を関連づけています。

miRNA発現の定量は、次世代シークエンシング（NGS）およびリアルタイムPCR（qPCR）を含む様々な技術で行うことができます。 NGSは新規miRNA発見のためのデフォルトツールですが、市販のライブラリー調製キットは煩雑でバイアスを導入します。 結果として、これまでmiRNA発現定量にはqPCRが用いられていました。 QIAseq miRNAは、新世代のsmall RNAシークエンシング製品で、他のシーケンシングキットにはない特長を含んでいます。 QIAseq miRNA Library Kitを使用することで、UMIによる単一分子の定量とNGSの能力を組み合わせて、最も代表的な発現データを得ることができるようになりました。

QIAGENは、試料分離からデータ分析および解釈まで、真のSample to Insightワークフローを提供します。 miRNeasyキットを使用して、生体液（血清、血漿、CSFおよび尿など）、細胞、新鮮/凍結組織またはFFPE組織から全RNAを最初に抽出します。 そこから、QIAseq miRNA Library Kitを使用してmiRNAシークエンシングライブラリーを調製します（図を参照）。

バイアスの無い反応では、アダプターをmiRNAの3 '末端および5'末端に連続して結合します。 続いて、UMIを導入したcDNA合成、cDNAクリーンアップ、ライブラリー増幅およびライブラリークリーンアップが行われます。 独自の方法により、修飾オリゴヌクレオチドを用いて、シークエンシングライブラリー中のアダプターダイマーを排除し、シークエンシング時に観察される主要な汚染物質を効果的に除去します。 ビーズベースのクリーンアップは、不要なバックグラウンドノイズを排除します。 UMIは、増幅またはシークエンシングアーティファクトではなく、サンプルが特異的にされていることを保証します。 サンプルからシーケンサーに移るまでに、わずか8時間しかかかりません。 最大48サンプルをマルチプレックス化することができます。

シーケンシングの後、 ".fastq"または ".fastq.gz"ファイルをGeneGlobe Data Analysis Centerに直接アップロードして、一次マッピングと分子タグカウントを行うことができます。 ヒト、マウス、ラットなどのよく特徴付けられた種については、種特異的miRBaseおよびゲノムデータベースにマップされます。 特徴づけられていない種または新規種については、miRBaseデータベース全体にマッピングされます。 次いで、分子タグ数計測および得られたデータの視覚化をとおして差次的発現解析を行います。

QIAseq miRNA Library Kitは、total RNAおよびmiRNAを含む、血清、血漿、CSF、尿などの生体液、細胞、新鮮/凍結組織、FFPE組織に適合しています。 QIAseq miRNAを使用して、次の循環miRNAバイオマーカーを特性化することができます。 FFPE組織に閉じ込められたmiRNAシグネチャーを明らかにすることができます。 新しい種を完全に特性化することができます。 QIAseq miRNA Library Kitは、血清などの生体液からの収量を高めるように設計されています。 miRNA検出の図では、QIAseq miRNA Library Kitによる血清サンプルからのmiRNAの確実な検出を示しています。 次いで、マッピングされたリードを、血清サンプル中のアダプターダイマーと比較しました。 QIAseq miRNAは、限られたサンプルでもmiRNAの優れたマッピングを示しています（ 血清サンプル中のリード分布を参照）。 QIAseq miRNA Library Kitを使用して、任意の種由来の全RNAサンプルから、既知または新規のmiRNAの差次的な発現を決定することができます。

QIAseq miRNAは、数百サンプルを処理する大規模プロジェクトから、標的miRNAのグループに焦点を当てた小さなパイロットまで、発見と発現を強化する究極のツールです。 QIAseq miRNAは、次世代シークエンシングを用いた差次的発現解析と新規miRNAの発見のための比類のないSample to Insightソリューションを提供します。