PyroMark Q24 MDx

• 经SFDA注册，符合中国医疗器械相关法规
• 序列信息确保发现稀有突变
• 一次运行可完成多个分析
• 最快15分钟内分析1–24个样本

PyroMark Q24 MDx实时定量焦磷酸序列分析仪应用经验证的焦磷酸测序技术，进行基于实时序列的定量检测分析，在欧洲和中国用于体外诊断。这个创新的平台非常适合用于突变的基因分型、评估疾病相关的DNA甲基化模式、验证生物标记物以及其他诊断相关的分析。

焦磷酸测序技术可对遗传学和表观遗传学的DNA变化进行准确、灵敏的定量分析，提供高度可靠的序列数据。可鉴定新的突变，并检测低水平的DNA甲基化模式异常。

焦磷酸测序步骤

步骤1：扩增DNA片段，作为焦磷酸测序模板的单链是生物素标记的。变性后，分离生物素标记的单链PCR扩增子，与测序引物杂交。杂交的引物和单链模板同各种酶，包括DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶、三磷酸腺苷双磷酸酶以及底物、腺苷酰硫酸（APS）和荧光素一起孵育（参见"Principle of Pyrosequencing — step 1"）。

步骤2：第一个脱氧核苷三磷酸（dNTP）加入反应中，在DNA聚合酶的作用下，dNTP结合到DNA链上与其互补的碱基位。每次结合都会释放与核苷酸相等摩尔量的焦磷酸脂（PPi）（参见"Principle of Pyrosequencing — step 2"）。

步骤3：在存在APS的条件下，ATP硫酸化酶将PPi转化为ATP。在这个ATP的驱动下，荧光素酶将荧光素转化为氧化荧光素，并产生可见光，可见光的量与ATP的量成正比。通过电荷耦合（CCD）相机即可检测到荧光素酶催化反应产生的可见光，并在原始数据输出（Pyrogram）中显示为一个峰，每个峰的高度（光信号）与结合的核苷酸数量成正比（参见"Principle of Pyrosequencing — step 3"）。

步骤4：三磷酸腺苷双磷酸酶，是一种核苷酸降解酶，会降解未结合的核苷酸与ATP。完全降解后，加入另一个核苷酸（参见"Principle of Pyrosequencing — step 4"）。

步骤5：持续添加dNTP。α-硫代脱氧腺苷三磷酸（dATPαS）在反应中用于替代天然脱氧腺苷三磷酸（dATP），这是因为DNA聚合酶可高效的应用前者，而不被荧光素酶识别。当该过程连续进行时，就会形成互补的DNA链，可根据Pyrogram追踪的信号峰确定核苷酸的序列（参见"Principle of Pyrosequencing — step 5"）。

专用的IVD验证分析

QIAGEN提供与PyroMark Q24 MDx实时定量焦磷酸序列分析仪配套的IVD验证分析。目前，这些试剂盒包括一些重要的癌症相关突变。

从PCR产物到直接用于测序的单链模板，应用PyroMark Q24 MDx Vacuum Workstation可在15分钟内同时制备24个样本。该工作站操作简单，且手动时间少于5分钟。

在焦磷酸测序之前，形成了一个生物素标记的PCR产物，该产物结合到覆盖链霉亲和素的琼脂糖凝胶珠上。这些胶珠会被真空仪器捕捉并彻底清洗，随后变性，产生适合于焦磷酸测序的单链DNA。该模板DNA放入含测序引物的焦磷酸测序反应板中，随后引物退火，将该板放入PyroMark仪器中。PyroMark Gold试剂包含用于焦磷酸测序反应的酶、核苷酸和底物，将这些试剂移入配药管或筒（取决于仪器），按照软件中提供的量放入仪器中，用于焦磷酸测序。

PyroMark Q24 MDx实时定量焦磷酸序列分析仪适合体外诊断应用，用于检测与临床相关的特定可变DNA位点的变化。

PyroMark Q24 MDx Software装载在PC机上，能够全面的分析您的结果。该软件包含2个分析模块：CpG和AQ（等位定量）。2个模块可分析在同一孔板中的样品，不同类型的样品可同时分析。AQ模块用于分析单个和di-、tri-和tetra-多个等位突变。CpG模块用于分析多个连续的CpG位点并提供经亚硫酸氢盐转化的内参。