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특징
- 에탄올, 헤파린 및 기타 잠재적 억제제와 같은 PCR 억제제의 캐리오버를 완화함
- 복잡한 이차 구조의 핵산 템플릿에 대한 반응에 도움이 됨
- EDTA와 같은 마그네슘 킬레이트 캐리오버에 대한 반응을 개선함
- dPCR, end-point PCR, qPCR용 QIAGEN 키트 및 기기와 호환 가능함
제품 세부 정보
Q-Solution Kit는 까다로운 qPCR 및 dPCR 반응에서 조건을 최적화하도록 제작되었습니다. 이 키트 박스에는 따로 또는 함께 사용할 수 있는 5x Q-Solution 및 25mM MgCl2가 포함되어 있습니다. 두 용액 모두 필요에 따라 농도 범위를 적정할 수 있습니다.
성능
PCR 억제제가 미치는 영향 최소화
Q-Solution은 혁신적인 다용도 PCR 첨가제로, 모든 QIAcuity 마스터 혼합물에 사용할 수 있습니다. Q-Solution의 특수한 속성을 이용하여 PCR 반응을 방해할 수 있는 억제제(예: 잔여 알코올, 헤파린, 부식산, 기타 중요 물질)의 캐리오버를 완화합니다(그림 1).
프라이머의 결합 친화성 강화
프라이머 또는 프로브 결합이 약해 PCR 성능이 저하된다고 의심되는 경우 PCR 반응에 MgCl2 를 첨가해 보세요.
dPCR 및 qPCR 마스터 혼합물과 호환 가능
모든 dPCR, end-point PCR 또는 qPCR 반응에는 처리량, 재현성, 민감도를 제공하는 어려운 PCR 조건이 존재할 수 있습니다. 데이터에 따르면 Q-Solution Kit는 응용 분야에 관계없이 일부 사례에서 두 구성 요소를 간단히 적정한 후 dPCR, end-point PCR, qPCR의 반응을 개선할 수 있습니다.
원리
Q-Solution은 DNA의 녹는점을 낮춰 GC 함량이 높거나 아데노 연관 바이러스(Adeno-Associated Virus, AAV) 유전체에서 발견되는 것과 같이 이차 구조가 복잡한 DNA로 인해 발생하는 어려움을 극복할 수 있습니다. 이 키트는 또한 억제제가 있는 경우 PCR 효율을 높입니다. MgCl2 추가는 선택 사항이며, 추가하면 EDTA와 같은 킬레이트제로 인해 PCR에 오류가 발생하는 것을 방지할 수 있습니다. MgCl2 는 DNA 중합효소의 필수 보조 인자로서 프라이머와 템플릿 간에 형성된 것을 포함하여 이중 가닥 DNA 구조를 안정화할 수 있습니다. 나노플레이트에서의 dPCR 반응 원리는 여기에 설명되어 있습니다.
절차
프로토콜은 단순하고 QIAcuity Digital PCR System을 갖춘 모든 실험실에서 수행할 수 있습니다. 사용자는 사용 설명서의 지침에 평소대로 반응 혼합물을 준비하거나 퀵 스타트 프로토콜에 설명된 대로 Q-Solution 및 MgCl2 를 첨가하면 됩니다. 혼합물은 나노플레이트에 피펫팅됩니다. 특정 반응 설정에서 최적의 농도를 찾기 위해 처음 사용할 때는 사용하기 전에 Q-Solution 및 MgCl2를 적정하는 것이 좋습니다.
응용 분야
Q-Solution Kit는 end-point PCR 및 qPCR은 물론 QIAcuity에 대한 다양한 dPCR 반응에 매우 적합합니다. 다양한 용도 예는 “리소스” 섹션의 응용 참고 사항을 확인하시기 바랍니다.
지원되는 데이터 및 수치
Q-Solution은 QIAcuity dPCR 반응에서 에탄올 캐리오버의 영향을 상쇄합니다.
QIAcuity Probe PCR 키트를 사용하여 dPCR Mutation Assay BRAF 476 Human으로 야생형 BRAF 유전자좌를 정량화하는 반응에서, 반응 혼합물에 3.5% 또는 5% 에탄올이 존재하면 1D 스캐터플롯에서 U자형 패턴이 나타나고, 에탄올이 없는 대조 반응과 비교하여 정량화가 저해되었습니다.
리소스
Certificates of Analysis (1)