RNeasy Fibrous Tissue Mini Kit – RNA Extraction

最大100 μgまでの繊維性組織からのトータルRNA精製用

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RNeasy Fibrous Tissue Mini Kit (50)

カタログ番号 / ID.   74704

50 RNeasy Mini Spin Columns, Collection Tubes (1.5 ml and 2 ml), Proteinase K, RNase-free DNase I, RNase-free Reagents and Buffers
RNeasy Fibrous Tissue Mini Kitは分子生物学的アプリケーション用であり、疾病の診断、予防、あるいは治療に使用することはできません。

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特徴

  • 線維性組織に至適化済みのプロトコール
  • 高収量のトータルRNA
  • あらゆるダウンストリームアプリケーションに対応する高品質RNA
  • DNase I処理によるゲノムDNAの除去

製品詳細

RNeasy Fibrous Tissue Mini Kitには、線維性組織サンプル中の多量なタンパク質を除去するproteinase Kと、100 µgまでの高品質RNA精製のためのRNeasy Spin Columnが含まれています。本キットはQIAcube上で自動化可能です。線維性組織サンプルはRNAlater RNA Stabilization ReagentあるいはAllprotect Tissue Reagentで簡便に安定化され、TissueRuptorあるいはTissueLyserシステムで効率的に破砕されます。より多量のサンプルにはRNeasy Fibrous Tissue Midi Kit(スピンカラム結合容量はRNA 1 mg)をご使用ください。

パフォーマンス

RNeasy Fibrous Tissue Kitは線維性組織での使用に至適化されています。RNeasy Fibrous Tissue調製法により、高品質なトータル RNAを簡単かつ効率的に精製できます(図" 線維性組織から得られた高品質RNA")。精製RNAは、アレイ解析およびリアルタイムRT-PCRなどのダウンストリームアプリケーションに適しています(図" 様々な線維組織のリアルタイム遺伝子発現解析"および" 心臓から得られた高品質RNAのLightCycler解析")。RNeasy Fibrous Tissue Mini Kitは、他のシリカベースによる精製法に比べ、線維性組織からトータルRNAをより高い収量で精製できます(表参照)。

その他のシリカベースによる精製法に比べ、RNeasy Fibrous Tissue KitはトータルRNAを最高の収量で精製できます。
ラット組織
(10 mg)
RNeasy Fibrous Tissue Mini Kitによる RNA収量* (µg)シリカキット(Supplier AV)による RNA収量*(µg) シリカキット(Supplier R)による
RNA収量*(µg)
シリカキット(Supplier S)による
RNA収量*(µg)
心臓 8.2 3.5 <0.5 2.5
筋肉 5.3 0.5 2.0 2.2
皮膚 6.0 未測定 未測定 未測定
食道 13.9 未測定 未測定 未測定
*メーカーの指示に従って表記の組織からRNAを精製した。
カラムの目詰まりにより低品質のRNA が分離され、収量は調製中のコンタミにより実際より高い値になっている。
図参照

原理

グアニジンイソチオシアネート溶解と、シリカゲルメンブレンによる迅速な精製法を組み合わせたRNeasyテクノロジーにより、トータルRNA精製を簡便に行なうことができます。RNeasy Fibrous Tissue Kit は骨格筋、心臓、大動脈のような繊維の豊富な組織からのRNA 精製のために最適化されています。これらの組織は収縮性タンパク質、結合組織およびコラーゲン量が多いために組織の溶解が困難です。RNeasy Fibrous Tissueプロトコールは、タンパク質とゲノムDNAを分解するために、RNA精製の際にproteinase K分解とカラム上でのRNase-free DNase分解ステップを組み込んでおり、高品質なトータルRNAを高い収量で得られます。RNeasy調製法ではmRNAおよび200 塩基以上のその他のRNA のみを精製するので、精製物は全細胞性RNAの15~20%を形成する5S rRNA、tRNA、その他の低分子RNAを含みません。

操作手順

0.5~30 mgの線維性組織サンプルをグアニジンイソチオシアネートバッファー中で溶解します。ライセート希釈後、サンプルをproteinase Kで処理します。デブリを遠心操作によりペレット化します。清澄化ライセートにエタノールを添加し、RNAをRNeasyシリカゲルメンブレンに結合させます。一緒に精製された可能性のある微量のDNAはRNeasy Spin Column上のDNase処理により除去されます。DNaseおよびその他の夾雑物は洗浄ステップにより除去され、最大100 µgの高品質なトータルRNAが150~500 µlのRNaseフリー水で溶出されます(図" RNeasy Fibrous Tissue Mini操作手順")。

図参照

アプリケーション

RNeasy Fibrous Tissue Kitを用いて精製した線維性サンプルから得られた高品質トータルRNAは、アレイ解析やリアルタイムRT-PCRを含むあらゆるダウンストリームアプリケーションに適しています。

裏付けデータと数値

仕様

特徴仕様
applicationsPCR, real-time PCR, microarray
elutionvolume30–100 µl
formatSpin column
timeperrunorperprep55 minutes
purificationoftotalrnamirnapolyamrnadnaorproteinRNA
processingManual
sampleamount0.5–30 mg
technologySilica technology
mainsampletypeFibre-rich tissue samples
yield5–12 µg

リソース

MSDS (1)
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
キットハンドブック (1)
クイックスタートプロトコール (1)
Certificates of Analysis (1)

出版物

Myofilament response to Ca2+ and Na+/H+ exchanger activity in sex hormone-related protection of cardiac myocytes from deactivation in hypercapnic acidosis.
Bupha-Intr T; Wattanapermpool J; Peña JR; Wolska BM; Solaro RJ;
Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol; 2006; 292 (2):R837-43 2006 Oct 12 PMID:17038443
A study of alternative splicing in the pig.
Nygard AB; Cirera S; Gilchrist MJ; Gorodkin J; Jørgensen CB; Fredholm M;
BMC Res Notes; 2010; 3 :123 2010 May 5 PMID:20444244
Macrophage-derived matrix metalloproteinase-2 and -9 promote the progression of cerebral aneurysms in rats.
Aoki T; Kataoka H; Morimoto M; Nozaki K; Hashimoto N;
Stroke; 2006; 38 (1):162-9 2006 Nov 22 PMID:17122420
Matrix metalloproteinase and tissue inhibitor expression in atherosclerotic and nonatherosclerotic thoracic aortic aneurysms.
Schmoker JD; McPartland KJ; Fellinger EK; Boyum J; Trombley L; Ittleman FP; Terrien C 3rd; Stanley A; Howard A;
J Thorac Cardiovasc Surg; 2007; 133 (1):155-61 2007 Jan PMID:17198804
Use of an aggressive MCF-7 cell line variant, TMX2-28, to study cell invasion in breast cancer.
Gozgit JM; Pentecost BT; Marconi SA; Otis CN; Wu C; Arcaro KF;
Mol Cancer Res; 2006; 4 (12):905-13 2006 Dec PMID:17189381