QuantiTect Whole Transcriptome Kit
对珍贵的RNA样本进行无限次real-time PCR分析
✓ 全天候自动处理在线订单
✓ 博学专业的产品和技术支持
✓ 快速可靠的（再）订购
QuantiTect Whole Transcriptome Kit (100)
目录编号 / ID. 207045
For 100 x 50 µl reactions: 100 µl T-Script Enzyme, 400 µl T-Script Buffer, 100 µl Ligation Enzyme 1, 100 µl Ligation Enzyme 2, 200 µl Ligation Reagent, 600 µl Ligation Buffer, 100 µl REPLI-g Midi DNA Polymerase, 2 x 1.45 ml REPLI-g Midi Reaction Buffer
反应
100
25
QuantiTect Whole Transcriptome Kit 旨在用于分子生物学应用。该产品不能用于疾病诊断、预防和治疗。
✓ 全天候自动处理在线订单
✓ 博学专业的产品和技术支持
✓ 快速可靠的（再）订购
特点
- 高cDNA产量用于无限次分析和长期保存
- 均一扩增所有cDNA和所有转录本区段
- 经优化的试剂，快速简单的操作流程
产品详情
QuantiTect Whole Transcriptome Kit对有限的RNA样品进行预扩增和逆转录，获得高产量cDNA，用于无限次real-time PCR基因表达分析。该试剂盒包含全转录扩增所需的全部酶和缓冲液。对Phi29聚合酶创新的修饰确保从低至1 ng RNA中制备多至40 μg cDNA。该聚合酶独特的加工过程可制备高度统一的cDNA，确保通过real-time PCR进行可靠的基因表达分析。
绩效
QuantiTect Whole Transcriptome Kit确保所有转录子高度一致的扩增，这对于基因表达分析是必需的。所有mRNA转录子以相同的形式同时在5'和3'末端扩增（参见" Equal amplification of 5' and 3' regions"）。图" Preservation of transcript profile", 显示高度稳定的转录子，该图将分别应用QuantiTect Whole Transcriptome Kit全基因组扩增的cDNA和用逆转录酶制备的未扩增cDNA进行了对比。
可获得多至40 μg的可重复、高产量的cDNA（参见" Reproducible cDNA yields"）。能够进行无限次real-time PCR分析，并具有高度重复性的CT值（参见" Reliable real-time PCR analysis"）。此外，由于cDNA比RNA更稳定，可以存档用于以后的研究工作。
| 起始材料 | 扩增时间 | 扩增产物的常规产量 | 可进行的real-time PCR次数* |
|---|---|---|---|
| 10 ng RNA | 2小时 | 至多10 µg cDNA | 1000 |
| 10 ng RNA | 8小时 | 至多40 µg cDNA | 4000 |
查看图表
原理
获得的生物样本量太少可能限制基因表达谱分析。使用QuantiTect Whole Transcriptome Kit可对少量珍贵的样品进行无限次real-time PCR分析。QuantiTect Whole Transcriptome Kit经优化，用于1 ng RNA或相当于约50个细胞RNA的全转录扩增，甚至可以用更少量的RNA，这些取决于RNA的品质和转录子的丰度。
QuantiTect Whole Transcriptome Kit含有逆转录酶、DNA聚合酶和优化的缓冲液及试剂，可对一个RNA样本的所有转录本进行扩增。此试剂盒整合了经质量验证的REPLI-g技术，通过非偏向序列扩增来合成cDNA。REPLI-g扩增采用Multiple Displacement Amplification（MDA）技术，应用独特加工的DNA聚合酶实现等温扩增（参见" Whole transcriptome amplification"）。该技术确保包括5’末端在内的所有转录区的同等扩增，从而获得可用于real-time PCR的足够多的cDNA。
查看图表
程序
从总RNA开始经过3个步骤可获得大量代表了整个转录子的cDNA（参见" Procedure"）。首先，应用优化的含有T-Script Enzyme的逆转录混合物（含有随机引物和oligo-dT引物）将RNA转录为cDNA。用高效的连接混合物连接，然后用基于经验证的REPLI-g技术的扩增混合物扩增cDNA。
查看图表
应用
QuantiTect Whole Transcriptome Kit制备的cDNA可用于QuantiFast或Rotor-Gene Kits进行的real-time PCR分析，且可以储存用于以后的分析，但不适用于微阵列分析。QIAGEN提供REPLI-g Kits and Service，用于小量或珍贵样品的全基因组扩增。扩增高度一致，具有最小的序列偏好，可制备适合于基因分型和Comparative Genome Hybridization等应用的DNA。
辅助数据和图表
Reproducible cDNA yields.
Total RNA (10 ng) from different blood samples was amplified for 2 or 8 hours using the QuantiTect Whole Transcriptome Kit. cDNA yields were determined using PicoGreen reagent.
规格
| 特点 | 规格 |
|---|---|
| amplification | Whole total RNA |
| startingmaterial | Purified total RNA |
| reactiontime | 5 hours or 11 hours |
| applications | Real-time PCR, gene expression analysis |
| minimalpipettingvolumeneeded | 1 µl |
| samplesperrunthroughput | Mid |
| technology | Reverse transcription followed by ligation and multiple displacement amplification (MDA) |
| yield | 10 µg or 40 µg cDNA |
| maximuminputvolume | 5 µl total RNA |
| startingamountoftotalrna | >10 ng purified total RNA |
| reactionvolume | 50 µl |
资源
试剂盒操作手册 (2)
安全数据表 (1)
补充实验方案 (1)
产品介绍与指南 (1)
基因表达分析 (1)
Certificates of Analysis (1)