QuantiTect PCR Kits

• Detección de dianas con pocas copias muy sensible
• qPCR mediante sondas específicas de secuencia o SYBR Green
• Cuantificación exacta sobre varios logaritmos del molde
• Sin necesidad de optimizar la reacción y las condiciones de termociclado
• Detección de hasta 5 dianas en el mismo tubo

Los QuantiTect PCR Kits (kits de qPCR) permiten la cuantificación sensible de las dianas de ADNg y ADNc mediante la PCR en tiempo real y la RT-PCR de dos pasos utilizando sondas específicas de secuencia o detección SYBR Green I. Los kits de real-time PCR también permiten la cuantificación fiable de hasta 5 dianas de ADNg y ADNc en un único tubo mediante la real-time PCR y múltiple o la RT-PCR de dos pasos. La combinación de un hot start y un sistema de tampón de PCR exclusivo en la mezcla maestra lista para usar garantiza una qPCR de alta sensibilidad en cualquier termociclador en tiempo real sin necesidad de optimización. La mezcla dNTP incluye dUTP, lo que permite el tratamiento opcional con UNG. Por motivos de conveniencia, las mezclas maestras en los QuantiTect PCR Kits pueden almacenarse a una temperatura de 2-8 °C.

Hay dos formatos de kits disponibles para la PCR múltiple utilizando sondas específicas de secuencia: el QuantiTect Multiplex PCR Kit para termocicladores que necesitan un colorante ROX para la normalización de la fluorescencia y el QuantiTect Multiplex PCR NoROX Kit para el resto de termocicladores.

La HotStarTaq DNA Polymerase incluida en los kits de PCR cuantitativa de QuantiTect aumenta la especificidad en la reacción de PCR al proporcionar el hot start más estricto en comparación con otras polimerasas.

Los QuantiTect SYBR Green PCR Kits permiten una cuantificación específica en un amplio intervalo lineal (consulte la figura “ Cuantificación específica en un amplio intervalo lineal”). Los QuantiTect SYBR Green PCR Kits ofrecen resultados sensibles y fiables cuando se usan en combinación con el QuantiTect Reverse Transcription Kit y los QuantiTect Primer Assays (consulte la figura “ Cuantificación específica y sensible”).

Los QuantiTect Probe PCR Kits ofrecen resultados sensibles y fiables cuando se usan en combinación con el QuantiTect Reverse Transcription Kit (consulte la figura “ Alta sensibilidad y eficacia y amplio rango dinámico”). La composición del tampón de PCR exclusivo permite que los QuantiTect Probe PCR Kits proporcionen una cuantificación sensible de dianas de ADN de pocas copias, así como una cuantificación exacta en un amplio intervalo lineal (consulte la figura “ Amplio rango dinámico en la real-time PCR”).

La QuantiTect Multiplex PCR Master Mix garantiza que los productos de PCR de una reacción múltiple se amplifiquen con la misma eficacia y sensibilidad que los productos de PCR en la reacción de amplificación simple correspondiente (consulte la tabla “Valores de termociclado de umbral (C_Τ) comparables con las PCR triples y únicas” y la figura “ Resultados comparables con las PCR cuádruples y únicas”).

Con los kits se pueden detectar tan solo 10 copias de un gen diana, incluso si el número de copias del gen de referencia en la misma reacción es hasta 10⁶ veces mayor (consulte la figura “ Detección de 10 copias del gen diana con exceso de genes de referencia” y la tabla correspondiente “qPCR triple cuantitativa correcta de dianas con bajo y alto nivel de abundancia”).

Los QuantiTect SYBR Green PCR Kits contienen una mezcla maestra optimizada y lista para usar para la cuantificación en tiempo real muy específica y sensible de dianas de ADNc utilizando SYBR Green I (consulte la tabla “Componentes del 2x QuantiTect SYBR Green PCR Kit”). El colorante fluorescente SYBR Green I en la mezcla maestra permite el análisis de muchas dianas diferentes sin necesidad de sintetizar sondas marcadas como específicas de diana. Una combinación equilibrada de iones de K⁺ y NH₄⁺ en el tampón de PCR favorece la hibridación de cebadores específicos y permite un alto nivel de especificidad y sensibilidad en la PCR (consulte la figura “Hibridación de cebadores específicos”). Además, la HotStarTaq DNA Polymerase proporciona un riguroso hot start, lo que impide la formación de productos no específicos.

Los QuantiTect Probe PCR Kits contienen una mezcla maestra optimizada y lista para usar para la cuantificación en tiempo real muy específica y sensible de dianas de ADNg y ADNc utilizando sondas específicas de secuencia (consulte la tabla “Componentes del 2x QuantiTect SYBR Green PCR Kit”). Los kits están diseñados para usarse con todos los tipos de sondas específicas de secuencia, incluida la detección de sondas de hidrólisis (p. ej., TaqMan® y otras sondas con doble marcador), sondas FRET y balizas moleculares. Los QuantiTect Probe PCR Kits incluyen un tampón de PCR exclusivo que contiene una combinación equilibrada de iones de K⁺ y NH₄⁺, que favorece la hibridación de cebadores específicos, esto permite un alto nivel de especificidad y sensibilidad en la PCR (consulte la figura “Hibridación de cebadores específicos”). Además, la HotStarTaq DNA Polymerase proporciona un riguroso hot start, lo que impide la formación de productos no específicos.

Los QuantiTect Multiplex PCR Kits permiten una correcta RT-PCR de dos pasos múltiple en el primer intento (consulte el diagrama de flujo “ Kits de análisis múltiples de QIAGEN”). La mezcla maestra optimizada garantiza que los productos de PCR de una reacción múltiple se amplifiquen con la misma eficacia y sensibilidad que los productos de PCR en la reacción de amplificación simple correspondiente. Con el kit se pueden detectar tan solo 10 copias de una diana.

La amplificación de genes diana y de referencia en la misma reacción, en lugar de en reacciones independientes, aumenta la fiabilidad de la cuantificación genética al reducir al mínimo los errores de manipulación. La QuantiTect Multiplex PCR Master Mix incluye una combinación equilibrada de iones de K⁺ y NH₄⁺, así como el exclusivo Factor MP sintético. La combinación de ambos favorece la hibridación estable y eficaz de cebadores y sondas al molde de ácido nucleico, lo que da como resultado una mayor eficacia de la PCR (consulte la tabla “Componentes del 2x QuantiTect Multiplex PCR Kit”). Además, la HotStarTaq DNA Polymerase proporciona un riguroso hot start, lo que impide la formación de productos no específicos.

Las mezclas maestras de los QuantiTect PCR Kits también contienen dUTP, lo que permite el pretratamiento con uracilo N-glicosilasa (UNG) antes de iniciar la PCR, que garantiza que las reacciones de PCR posteriores no se vean afectadas por productos de PCR contaminantes.

Si es necesario, se puede realizar el pretratamiento de las reacciones con uracilo N-glicosilasa (UNG) para eliminar el arrastre de productos de PCR de otras reacciones. Para obtener resultados óptimos con las RT-PCR de dos pasos en tiempo real, recomendamos sintetizar ADNc utilizando el QuantiTect Reverse Transcription Kit. El kit realiza la síntesis rápida del ADNc en solo 20 minutos con la eliminación integrada de la contaminación del ADN genómico.

Los QuantiTect SYBR Green y Probe PCR Kits no hacen necesaria la optimización de las condiciones de reacción, lo que puede ser tedioso y demandar mucho tiempo. Simplemente añada cebadores y un molde de ADN a la mezcla maestra para PCR lista para usar e inicie la reacción. Siga el protocolo del manual de uso para obtener resultados rápidos y fiables en cualquier termociclador en tiempo real.

Se garantizan resultados muy específicos en el análisis de expresión génica cuando se utilizan QuantiTect SYBR Green PCR Kits en combinación con QuantiTect Primer Assays. Se trata de conjuntos de cebadores de genoma completo validados por vía bioinformática destinados a la detección de transcritos de muestras humanas, de ratón, rata y muchas otras. Los QuantiTect Primer Assays se pueden pedir fácilmente en línea en GeneGlobe.

Los QuantiTect Multiplex PCR Kits contienen mezclas maestras listas para usar que eliminan la necesidad de optimizar las condiciones de reacción y termociclado. El manual de uso contiene un protocolo único que puede utilizarse con todos los termocicladores en tiempo real disponibles e incorpora una lista de los colorantes recomendados.

Los kits están disponibles con o sin colorante de referencia pasivo ROX en la mezcla maestra, lo que permite utilizar casi cualquier termociclador en tiempo real (consulte la tabla “Elegir el QuantiTect Multiplex PCR Kit correcto”). Gracias a las concentraciones optimizadas de ROX, se logra la detección incluso de números de copias bajos a través del análisis automático de los datos.

Los QuantiTect PCR Kits pueden utilizarse para el análisis de expresión génica de ADNc o la cuantificación de ADNg en cualquier termociclador en tiempo real. Esto incluye instrumentos de Applied Biosystems, Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, Roche y Agilent. Para el Rotor-Gene Q y otros termocicladores Rotor-Gene, recomendamos el uso del Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit, del Rotor-Gene Probe PCR Kit o del Rotor-Gene Multiplex PCR Kit, que se han desarrollado especialmente para el termociclado rápido en esos instrumentos.