QIAEX II System Gel Extraction Kit

• 40 bp ～ 50 kbのDNAの効率的な抽出
• TAEまたはTBEアガロースゲルおよびポリアクリルアミドゲルからのゲル抽出
• その後の反応を妨げるヨウ化ナトリウムは使用しない
• 大きなDNAフラグメントの剪断

QIAEX IIシステムは、カオトロピック塩の存在下でDNAフラグメントが結合するシリカ粒子の懸濁液です。QIAEX II Suspensionを溶液または可溶化アガロースゲルスライスに添加すると、DNAに結合します。短時間の遠心分離操作により粒子が回収され、洗浄された後、40 bp ～ 50 kbのDNAがTrisバッファーまたは水で溶出されます。

QIAEX IIシステムを使用すると、10 ng ～ 10 µgのDNAが効率的に回収されます（ 「一貫した回収」の図を参照）。この用途の広い、ゲルフラグメントのバッチ精製用手順は容易にスケールアップして、30 µl QIAEX Ii懸濁液を使用して15 µgまで結合することができます。

QIAEX Iiシステムは、60–95%のDNAフラグメント（40 bp – 50 kb）を精製するためのシリカ粒子の懸濁液です。10 µl のQIAEX II suspensionで、最大5 µgのDNAに結合し、20 µlで溶出されます。

サイズに応じた回収

QIAEX IIシステムによるDNAフラグメントの精製は、アガロースの可溶化とカオトロピック塩の存在下でのQIAEX IIシリカゲル粒子上への核酸の選択的吸着に基づいています。QIAEX IIは、フェノール抽出やエタノール沈殿を用いることなく、DNAを塩、アガロース、ポリアクリルアミド、色素、タンパク質およびヌクレオチドからDNAを分離します。QIAEX IIは、TAEまたはTBEバッファーのいずれかで、あらゆるタイプのアガロースに対して効果的です。

QIAEX II粒子は、ゲル抽出のために使われます。大きなDNAフラグメントに対して剪断をすることなく効率的に回収します。最適化されたバッファーにより、ヨウ化ナトリウムなしでDNAの回収ができます。ヨウ化ナトリウムはDNAサンプルから除去することができず、後に続く反応に影響するおそれがあるためです。

QIAEX IIシステムと共に使用する可溶化および結合バッファーには、ユニークなpH指示薬が含まれています。単純な色の変化で、結合混合液のpHが、QIAEX IIシリカ粒子へのDNAの効率的な吸着に最適かどうかを判断することができます。（ 「pH指示薬色素」の図を参照）この色素は、さらに結合混合液内の可溶化しないアガロースを容易に可視化することもでき、最大の収量を得るために完全な可溶化を保証します。

可溶化および結合バッファー中のpH指示薬色素により、DNA吸着の最適なpH（pH ≤7.5）を目視で簡単に決定することができます。アガロースゲル電気泳動バッファーを繰り返し使用したり、バッファーの調製が間違っていたりすると、binding-mixtureのpHが不適切になるおそれがあります。この場合、pHは、10 µlの3 M 酢酸ナトリウム、pH 5.0を追加することで容易に調整できます。

QIAEX IIシリカゲル粒子は、可溶化したゲルスライスに添加され、短い遠心分離のステップにより回収されます。（ 「QIAEX IIの操作手順」のフローチャートを参照）。洗浄後、純粋なDNAフラグメントは20 µlのTrisバッファーまたは水に溶出します。

QIAEX IIシステムは、結合および洗浄バッファーや総合ハンドブックと共にQIAEX II懸濁液を提供します。アガロースゲル、溶液、ポリアクリルアミドゲルからのDNA精製のためのプロトコールが提供されています。

QIAEX IIシステムで精製されたDNAは、直接に以下を含むほとんどのアプリケーションに使用できます。

• 制限酵素処理
• Labeling
• ライゲーション
• PCR