QIAGEN Multiplex PCR Kit

• 至適化不要
• ホットスタート導入により高い特異性と感度
• 様々なマルチプレックスPCR アプリケーションに最適
• 操作が簡単でかつ経済的

QIAGEN Multiplex PCR Kitは即使用可能なマスターミックス・フォーマットとしてお届けします。QIAGEN Multiplex PCR Kit には、HotStarTaq DNA Polymerase の入ったQIAGEN Multiplex PCR Master Mix、およびFactor MP を含むPCR バッファーが添付されています。至適化済みの塩濃度とともに、Factor MP は特異的に結合したプライマーを安定化し、至適化なしに反応液中の全プライマーで効率的なエクステンションを実現します。増幅困難なテンプレート（GC リッチ）用に画期的なQ-Solution も添付されています。

QIAGEN Multiplex PCR Kitは他社に比べて高性能で、特異性と感度の高いマルチプレックス増幅を実現します（図“ 16plex PCR成功例 ”）。本キットはトランスジェニック生物のタイピング（図 " トランスジェニック・マウスのジェノタイピング"）やマイクロサテライト解析（図 " マイクロサテライト解析成功例 "） などの様々なタイプのアプリケーションに最適です。マスターミックス中のHotStarTaq DNA Polymeraseは複数のターゲットを同時に効率的に増幅します。マスターミックスに入っている画期的なPCRバッファーにより、増幅効率はさらに改善されています。ユニークなバッファーは、最適化の必要性を最小限に抑え、広範のPCR条件で特異性の高いPCRを実証します。GCリッチなテンプレートを増幅するために添加されているQ - Solution（キットに付属）により、不適切なPCR条件を改善することができます。

HotStarTaq DNA Polymerase 詳細データ

濃度：5 units/µl
組み換え酵素：Yes
基質アナログ：dNTP、ddNTP、dUTP、biotin-11-dUTP、DIG-11-dUTP、 fluorescent-dNTP/ddNTP
エクステンション速度：72℃ で2～4 kb/min　
半減期：97℃で10分、94℃で60分　
増幅効率：≥10⁵ 倍
5'–>3' エキソヌクレアーゼ活性：Yes
余分なA付加：Yes
3'–>5' エキソヌクレアーゼ活性：No
ヌクレアーゼの混入：No
RNaseの混入：No
プロテアーゼの混入：No
自己プライマー活性：No 

QIAGEN Multiplex PCR Kit はマルチプレックスPCR用に特別に開発された初めてのキットで、使い易いマスターミックスフォーマットが添付されています。QIAGEN Multiplex PCR Master Mixには前もって至適化された濃度のHotStarTaq DNA Polymerase、MgCl₂、dNTPsおよびマルチプレックスPCR反応用に特に開発したPCRバッファーが含まれています。本キットでは最初のマルチプレックスPCR実験で良好な結果を実現します。以下のような最適化済みの試薬や酵素により、本キットでは反応条件（例；プライマー、Mg²⁺、Taq DNA polymeraseの濃度）およびサイクリングパラメーターの至適化は不要です。

HotStarTaq DNA Polymerase

HotStarTaq DNA PolymeraseはTaqDNA polymeraseを化学的に修飾したもので、常温では活性がありません。これにより、低温でのPCRセットアップや最初のPCRサイクルで非特異的な増幅産物およびプライマーダイマーの形成を防ぎます。HotStarTaq DNA Polymeraseは、95℃、15 分間のインキュベーションステップで活性化され、このステップは既存のサーマルサイクリングのプログラムに容易に導入できます。

Multiplex PCR Buffer

この特殊なバッファーは最適な配合比のK⁺とNH₄⁺、ならびに革新的なPCR添加物であるFactor MPが入っています。 これはテンプレート周辺でのプライマー濃度を高めます。K⁺ や他の陽イオンと共に、Factor MPは特異的に結合したプライマーを安定化し、HotStarTaq Plus DNA Polymerase による効果的なプライマー・エクステンションを可能にします（図“ 安定で効率的なプライマー・アニーリング”）。画期的なバッファーは、各PCR ステップのアニーリングステップ中でプライマーの特異的結合の割合を非特異的結合に対して高めることにより、各PCRサイクルの特異的な増幅を実現します。このバッファーはユニークな配合比のKClと (NH₄)₂SO₄を含み、従来のPCRバッファーに比べ、幅広いアニーリング温度やMg²⁺濃度の範囲で厳密で特異的なプライマー・アニーリングを実現します。従って、異なるアニーリング温度あるいはMg²⁺ 濃度を用いて行なうPCRの至適化は最小限ですみ、または不要なこともあります。

Q-Solution

HotStarTaq DNA Polymeraseに添付されている画期的なPCR添加剤であるQ-Solution は、DNA の変性環境を改善し、増幅困難なテンプレートの増幅を可能にします。このユニークな試薬により、高度な二次構造をもつテンプレートやGC リッチなテンプレートなどにより生じる不適切なPCR 条件が改善されることがあります。Q-Solutionは、DMSOのような通常使用される他のPCR添加物とは異なり、毒性がなく、一定の濃度で使用でき、PCRの正確性を損なわずにPCR純度を確保します。

QIAGEN Multiplex PCR Kit にはすでに至適化され即使用可能なマスターミックスが添付され、さらに使いやすくなっています。マスターミックスを使用すると、時間の節約、反応セットアップの簡略化、ピペッティングエラーやコンタミの発生源排除による再現性向上を実現します - ピペッティング操作は最小限に抑えられ、時間のかかる計算は不要です。プライマートテンプレートのみを添加して最終の増幅ミックスを調製します。マスターミックスは2～8℃で保存できるので、マルチプレックスPCRアッセイのセットアップをさらに迅速に行なえます。キットに付属の詳細なプロトコールは、迅速で容易なPCRセットアップを実現します。反応は室温で設定することができるので、使いやすく便利です。HotStarTaq DNA Polymeraseは、95℃、15 分間のインキュベーションステップで活性化され、このステップは既存のサーマルサイクリングのプログラムに容易に導入できます。

QIAGEN Multiplex PCR Kitは様々なタイプのアプリケーションに最適です。

• トランスジェニック生物のタイピングと解析
• マイクロサテライトの増幅と解析
• バクテリアおよびウイルスのタイピングと検出
• SNP解析用に複数のDNA領域の増幅