QIAGEN Multiplex PCR Kit
用于高特异性和灵敏度的多重PCR，无需优化
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QIAGEN Multiplex PCR Kit (100)
目录编号 / ID. 206143
For 100 x 50 µl multiplex PCR reactions: 2x QIAGEN Multiplex PCR Master Mix (providing a final concentration of 3 mM MgCl2, 3 x 0.85 ml), 5x Q-Solution (1 x 2.0 ml), RNase-Free Water (2 x 1.7 ml)
Product
QIAGEN Multiplex PCR Kit (100)
QIAGEN Multiplex PCR Kit (1000)
QIAGEN Multiplex PCR Kit 旨在用于分子生物学应用。该产品不能用于疾病诊断、预防和治疗。
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特点
- 无需优化步骤
- 高特异性和高灵敏度，热启动
- 高度适合用于各种类型的多重PCR应用
- 使用简单，经济实惠
产品详情
QIAGEN Multiplex PCR Kit提供方便的即用型预混液。QIAGEN Multiplex PCR Master Mix包含HotStarTaq DNA Polymerase和含有新型合成因子MP的独特PCR缓冲液。配合优化的盐浓度，MP因子可以促进引物与模板的特异性结合，使反应体系中所有的引物都能有效延伸，无需额外优化。该试剂盒还包含新型的辅助剂Q-Solution，有助于实现“困难”模板（比如，GC含量高的模板）的高效扩增。
绩效
QIAGEN Multiplex PCR Kit可确保高特异性和灵敏度的多重PCR扩增（参见" Successful 16-plex PCR "）。该试剂盒能成功应用于各种多重应用，如转基因生物分型（参见" Genotyping transgenic mice"）和微卫星分析（参见" Successful microsatellite analysis "）。该混合物包含HotStarTaq DNA Polymerase，用于高效的平行扩增多个靶。扩增效率经新型的PCR缓冲液进一步优化，该缓冲液也包含在混合物中。独特的缓冲液确保了在广泛的PCR条件下PCR的特异性，无需优化步骤。试剂盒还包含辅助剂Q-Solution，用于扩增高GC含量的模板，优化PCR反应。
HotStarTaq DNA Polymerase规格
浓度：5单位/µl
重组酶：有
底物类似物：dNTP、ddNTP、dUTP、biotin-11-dUTP、DIG-11-dUTP、荧光-dNTP/ddNTP
延伸率：72°C下2–4 kb/分钟
半衰期：97°C下10分钟；94°C下60分钟
扩增效率：≥105倍
5'–>3'外切酶活性：有
Extra A辅助剂: 有
3'–>5'外切酶活性：无
污染核酸：无
污染RNA酶：无
污染蛋白酶：无
自吸泵活性：无
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原理
QIAGEN Multiplex PCR Kit是首个专为多重PCR研发的试剂盒，有即用型混合液规格。QIAGEN Multiplex PCR Master Mix包含预优化浓度的HotStarTaq DNA Polymerase和MgCl2、dNTPs和新型的PCR缓冲液专为多重PCR研发。该试剂盒在首次尝试多重PCR即获得成功。由于试剂盒内独特的预优化的试剂无需优化反应条件（比如，引物浓度，Mg2+和Taq DNA聚合酶）和循环参数。
HotStarTaq DNA Polymerase
HotStarTaq DNA Polymerase对 Taq DNA聚合酶进行改善，在室温下无聚合酶活性。这可以防止非特异性退火引物和在低温条件下的PCR设置和初始的PCR循环中形成引物二聚体。在95°C下，经15分钟诱导可激活HotStarTaq DNA Polymerase，可纳入各种现有的热循环程序中。
多重PCR缓冲液
这特殊的缓冲液包含优化的由K+和NH4+以及独特的PCR辅助剂、MP因子可增加模板引物的局部浓度。配合K+和其他阳离子、MP因子稳定特异性结合的引物，并能够用HotStarTaq DNA Polymerase进行高效的引物延伸（参见" Stable and efficient primer annealing"）。通过在每个PCR循环中高比率的特异性-非特异性引物结合，该新型的缓冲液维持每个PCR循环的特异性扩增。由于KCl和(NH4)2SO4独特的平衡结合，相比传统的PCR缓冲液，该缓冲液能在更广泛的退火温度和Mg2+浓度下，提供严格的引物退火条件。通过改变退火温度或Mg2+浓度可优化PCR，因此通常将优化过程最小化或无需要优化。
Q-Solution
Q-Solution是一种新型的PCR辅助剂，有助于扩增由DNA融化特性修改的困难模板，同时配合HotStarTaq DNA Polymerase提供。该独特的试剂可优化高度二级结构或富含GC的模板所致的效果欠佳的PCR。不同于其他常用的PCR辅助剂如DMSO，Q-Solution只用于一种工作浓度，并保证无毒和PCR纯度好。
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程序
QIAGEN Multiplex PCR Kit含有即用型、预优化的混合液，非常方便。使用混合液节省时间、简化反应体系构建流程，并通过消除移液失误和污染，增加可靠性，减少移液步骤和繁琐的计算。只需加入引物和模板来制备最终扩增混合液。混合液可在2–8°C储存，可快速设置多重PCR检测。该试剂盒提供的精简的实验方案确保快速简单的PCR设置。可在室温下设置反应，简单方便，易于使用。HotStarTaq DNA Polymerase可在95°C下孵育15分钟激活，因此可整合入各种现有的热循环流程中。
应用
QIAGEN Multiplex PCR Kit高度适用于各种多重应用，包括：
- 转基因生物的分型和分析
- 微卫星的扩增和分析
- 细菌和病毒的分型和检测
- 用于SNP分析的多个DNA扩增
辅助数据和图表
Successful 16-plex PCR.
Multiplex PCR of 16 targets (99–955 bp) was carried out for 35 cycles using standard conditions for the QIAGEN Multiplex PCR Kit, without further optimization or using a variety of conditions with a hot-start DNA polymerase from Supplier AII. [A] Comparison using 2.5 units per 50 µl reaction of the hot-start DNA polymerase from Supplier AII and with the indicated Mg2+ concentrations. [B] Comparison using the optimized Mg2+ concentration (3.5 mM) for the hot-start DNA polymerase from Supplier AII (part A) and the indicated amounts of enzyme per 50 µl reaction. Successful results were ensured with the QIAGEN Multiplex PCR Kit. M: markers.
规格
| 特点 | 规格 |
|---|---|
| applications | PCR, RT-PCR, multiplex PCR, typing, detection |
| enzymeactivity | 5' -> 3' exonuclease activity |
| reactiontype | PCR amplification |
| withwithouthotstart | With hotstart |
| singleormultiplex | Multiplex |
| realtimeorendpoint | Endpoint |
| mastermix | Yes |
| sampletargettype | Genomic DNA and cDNA |
资源
补充实验方案 (1)
产品介绍与指南 (2)
试剂盒操作手册 (1)
快速启动实验方案 (1)
安全数据表 (1)
技术资讯 (1)
Certificates of Analysis (1)
文献
Screening for clinically significant non-deletional alpha thalassaemia mutations by pyrosequencing.
Ann Hematol; 2010; 89 (12):1215-21 2010 Jun 22 PMID:20567827
Pyrosequencing-based strategy for a successful SNP detection in two hypervariable regions: HV-I/HV-II of the human mitochondrial displacement loop.
Electrophoresis; 2010; 31 (2):309-14 2010 Jan PMID:20084631
In vitro analysis of huntingtin-mediated transcriptional repression reveals multiple transcription factor targets.
Cell; 2005; 123 (7):1241-53 2005 Dec 29 PMID:16377565
Isolation of genomic DNA from buccal swabs for forensic analysis, using fully automated silica-membrane purification technology.
Leg Med (Tokyo); 2003; 5 Suppl 1 :S145-9 2003 Mar PMID:12935575