QIAGEN Plasmid Plus Kits – プラスミドDNA抽出
最高10 mgまでのトランスフェクショングレードのプラスミドDNAを最も迅速かつ簡便に精製
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QIAGEN Plasmid Plus Midi Kit (25)
カタログ番号 / ID. 12943
25 QIAGEN Plasmid Plus Midi Columns, Extender Tubes, Reagents, Buffers, 25 QIAfilter Midi Cartridges
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KitAccessories
QIAGEN Plasmid Plus Kit
QIAvac Holder
VacValves
カラムタイプ
Midi
Maxi
Mega
Giga
Trial Kit
調製
25
100
QIAGEN Plasmid Plus Kitsは分子生物学的アプリケーション用であり、疾病の診断、予防、あるいは治療に使用することはできません。
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特徴
- 最大24サンプルを迅速に精製
- 迅速な吸引操作で同時調製可能
- 少ない溶出量で高濃度DNA
- 特殊な洗浄バッファーで非常に低いエンドトキシンレベル（<1 EU/µg）
製品詳細
QIAGEN Plasmid Plus Kits は最高10 mgの高純度プラスミドDNAをラージスケールで非常に迅速に精製します。吸引マニホールドを用いて最高24個のサンプルを同時に精製でき、マニュアルでの作業時間を短縮できます。溶出量が少ないので高濃度のプラスミドDNAが得られ、すぐに使用できます。 エタノール沈殿は不要です。さらに QIAGEN Plasmid Plus Kits には、洗浄バッファーが含まれており、精製されたプラスミドはエンドトキシンレベルが低いという特長もあります。 精製されたプラスミドは様々なアプリケーションに最適で、感受性の高い細胞株にもトランスフェクトできます。
パフォーマンス
安定した品質および性能
QIAGEN Plasmid Plus テクノロジーは、陰イオン交換テクノロジーと同等の性能および純度を実現します。QIAGEN Plasmid Plus columns のユニークな結合ケミストリーにより高純度なプラスミドDNAが安定して精製できます。高収量プロトコールおよびそれに必要な追加のバッファー量もIAGEN Plasmid Plus Kits に入っており、RNA、タンパク質、ゲノムDNAなどの夾雑物を含まない高純度のプラスミドDNAを最高10 mg（Giga）、2 mg（Mega）、1 mg（Maxi）、250 µg（Midi）まで得られます（図 " QIAGEN Plasmid Plus Kits（QPP）は高収量を実現" および " 分析クロマトグラム"）。
エンドトキシンレベルが非常に低いトランスフェクショングレードDNA
リポ多糖類またはLPSとして知られているエンドトキシンは、E. coli などのグラム陰性菌の細胞膜成分であり、プラスミド精製の溶解ステップ中に放出されます。エンドトキシンは非特異的な免疫応答の活性化を誘導するため、トランスフェクション実験のセットアップにおいてコントロールできない変動要素となり、実験結果およびその再現性に影響し、結果の比較および解釈が困難になります。
キットに添付のエンドトキシン洗浄バッファーを利用することにより、バクテリア由来のエンドトキシンレベルを通常1 EU/μg DNA 以下に減らすことができます。エンドトキシンレベルは宿主菌株、培養液、細胞密度により変動します。細胞密度が非常に高い場合には、エンドトキシンレベルが1–3 EU/μg DNA の範囲で多少高くなることがあります。このような特性により、精製したプラスミドDNAは感受性の高い細胞株へのトランスフェクションをはじめとする多くのアプリケーションに最適です （図 " QIAGEN Plasmid Plus Kits を用いた場合のエンドトキシンレベル"、" 様々なプラスミドDNA 調製法を用いた際のエンドトキシンレベル"、" 感受性の高い細胞株への効果的なトランスフェクション"）。
図参照
原理
QIAGEN Plasmid Plus Kitsはラージスケールのプラスミドを簡単に調製するため方法です。QIAGEN Plasmid Plus columnsのデザインおよびユニークな結合ケミストリーにより、結合、洗浄、溶出ステップが簡便に行なえます。この操作によりQIAGEN Plasmid Plus Kits は超高速なラージスケールのプラスミド調製を実現し、MaxiおよびMidi調製にかかる時間は20 分です。得られた高濃度なプラスミドDNAは、続くアプリケーションにすぐに使用できます。エタノール沈殿は不要です。このように、本キットで得られるプラスミドDNAは、微量の反応容量を必要とするアプリケーションに最適です。
LyseBlueを用いて最大のプラスミド収量を実現
バッファーの混和が最適に行なわれているかを簡単に目視で判断できる、オプションの色素指示薬LyseBlueもキットに含まれています。この試薬により、非効率的な溶菌操作およびSDS、ゲノムDNA、細胞残渣の不完全な沈殿を引き起こす一般的な操作ミスを防ぐことができます。このユニークなバッファー添加剤は、溶液の色変化だけで最適な溶菌操作および溶液の中和を確認でき、収量の増大を実現します。
特徴 | Plasmid Plus Giga Kit | Plasmid Plus Mega Kit | Plasmid Plus Maxi Kit | Plasmid Plus Midi Kit |
| Applications | Transfection of most cell lines, cloning, enzymatic restriction, in-vitro translation/transcription, sequencing | Transfection of most cell lines, cloning, enzymatic restriction, in-vitro translation/transcription, sequencing | Transfection of most cell lines, cloning, enzymatic restriction, in-vitro translation/transcription, sequencing | Transfection of most cell lines, cloning, enzymatic restriction, in-vitro translation/transcription, sequencing |
| Culture volume/starting material | 2500 ml culture volume | 500 ml culture volume | 50–200 ml culture volume | 25–50 ml culture volume |
| Final DNA concentration | ≥1 µg/µl | ≥1 µg/µl | ≥1 µg/µl | ≥1 µg/µl |
| Plasmid type | Plasmids, cosmids | Plasmids, cosmids | Plasmids, cosmids | Plasmids, cosmids |
| Processing | Manual (centrifugation and vacuum), parallel processing | Manual (centrifugation and vacuum), parallel processing | Manual (centrifugation and vacuum), parallel processing | Manual (centrifugation and vacuum), parallel processing |
| Samples per run; throughput | 1–12 samples per run | 1–12 samples per run | 1–24 samples per run | 1–24 samples per run |
| Technology | Advanced silica technology (non-chaotrophic), endotoxin reduction | Advanced silica technology (non-chaotrophic), endotoxin reduction | Advanced silica technology (non-chaotrophic), endotoxin reduction | Advanced silica technology (non-chaotrophic), endotoxin reduction |
| Time per run | 50 min | 40 min | 20 min | 20 min |
| Yield | up to 10 mg | up to 2.5 mg | up to 1 mg | up to 250 µg |
操作手順
QIAGEN Plasmid Plus Kits に添付のQIAfilter Cartridges によりライセートを迅速に清澄化できます。1ステップで清澄化ライセートをカラムにアプライできるので時間の節約に繋がります。QIAGEN Plasmid Plus columnにアプライした清澄化ライセートおよび続いて行なう洗浄バッファーの吸引には吸引マニホールド（QIAvac 24 Plus）を使用します。メンブレンの洗浄および乾燥後、遠心操作により高濃度DNAが少量で溶出されます（図 " QIAGEN Plasmid Plus 操作手順"）。
図参照
アプリケーション
QIAGEN Plasmid Plus Kitsは以下のようなアプリケーションに最適なトランスフェクショングレードのプラスミドDNA を調製します。
- Huh-7のような感受性の高い細胞株を含むほとんどの細胞株へのトランスフェクション
- 制限酵素分解
- クローニング
- In vitro 転写／トランスレーション
- シークエンシング
裏付けデータと数値
Efficient transfection in sensitive cell lines.
Plasmid pCMVβ DNA was prepared using the indicated preparation method with standard and high-yield (HY) protocol for QIAGEN Plasmid Plus Kits. Huh-7 cells were transfected using 200 ng plasmid DNA and 0.5 μl Attractene Transfection Reagent or 300 ng plasmid DNA and 0.75 μl Attractene Transfection Reagent.
リソース
キットハンドブック (1)
テクニカルインフォメーション (3)
MSDS (2)
クイックスタートプロトコール (3)
パンフレット (1)
Certificates of Analysis (1)