QIAEX II System Gel Extraction Kit

• 40bp에서 50kb까지 효율적인 DNA 추출
• TAE 또는 TBE 아가로스 겔 및 폴리아크릴아미드 겔에서 겔 추출
• 후속 반응을 방해하는 sodium iodide이 없음
• 큰 DNA 절편이 절단되지 않음

QIAEX II system은 카오트로픽 염(chaotropic salts)이 존재할 때 DNA 단편이 결합되는 실리카 입자의 현탁액을 제공합니다. QIAEX II Suspension을 용액 또는 가용화된 아가로스 겔 절편에 첨가하면 DNA와 결합합니다. 짧은 원심분리를 통해 입자를 채집하고 세척한 후 Tris 완충액 또는 물에서 40bp~50kb의 DNA를 용출합니다.

QIAEX II system으로 10ng~10µg의 DNA를 효율적으로 회수할 수 있습니다(그림  "일관된 회수율" 참조). 겔 절편의 배치 정제를 위한 다목적 절차는 30µl QIAEX II suspension을 사용함으로써 15µg의 결합력까지 쉽게 확대할 수 있습니다.

QIAEX II system은 60~95% DNA 절편(40bp~50kb)을 정제할 수 있는 실리카 입자를 제공합니다. 10µl의 QIAEX II suspension은 최대 5µg의 DNA와 결합하며, 이후 20µl로 용출됩니다.

크기에 따른 회수율

QIAEX II system의 DNA 절편 정제는 아가로스의 가용화와 카오트로픽 염(chaotropic salt)이 있는 상태에서 핵산을 QIAEX II 실리카겔 입자에 선택적으로 흡착시키는 원리를 기반으로 합니다. QIAEX II는 페놀 추출이나 에탄올 침전 없이 염, 아가로스, 폴리아크릴아미드, 염료, 단백질, 뉴클레오타이드에서 DNA를 분리합니다. QIAEX II는 TAE 또는 TBE 완충액 내 모든 유형의 아가로스에 효과적입니다.

QIAEX II 입자는 겔 추출을 위한 슬러리(slurry)를 제공하며 큰 DNA 단편도 절단시키지 않고 효율적으로 회수할 수 있습니다. 최적화된 완충액을 사용하면 DNA 샘플에서 제거하기 어렵고 후속 반응에 영향을 줄 수 있는 sodium iodide 없이도 DNA를 회수할 수 있습니다.

QIAEX II system과 함께 사용되는 가용화 및 결합 완충액에는 고유한 pH indicator 염료가 포함되어 있습니다. DNA를 QIAEX II 실리카 입자에 효율적으로 흡착하기 위해 간단한 색상 변화로 결합 혼합물의 pH가 최적인지 여부를 확인할 수 있습니다(그림  "pH indicator 염료" 참조). 또한 유색 염료를 사용하면 결합 혼합물에서 불용화된 아가로스를 쉽게 확인할 수 있어 수율을 극대화할 수 있도록 완전히 용해할 수 있습니다.

가용화 및 결합 완충액에 pH indicator 염료를 넣어 DNA 흡착에 적합한 최적의 pH(pH ≤7.5)를 눈으로 쉽게 확인할 수 있습니다. 아가로스 젤 전기영동법 완충액을 너무 많이 사용했거나 잘못 조제한 경우 결합-혼합물 pH가 올바르지 않을 수 있습니다. 이 경우 pH 5.0 10µl 3M 아세트산 나트륨을 첨가하여 pH를 쉽게 조절할 수 있습니다.

용해된 겔 절편에 QIAEX II 실리카겔 입자를 첨가하고 간단한 원심분리 단계를 통해 입자를 채집합니다(순서도  "QIAEX II 절차" 참조). 세척 후, 순수한 DNA 절편을 20µl의 Tris 완충액 또는 물에서 용출합니다.

QIAEX II system은 결합 및 세척 완충액과 함께 QIAEX II suspension과 포괄적인 안내서를 제공합니다. 아가로스 겔, 용액, 폴리아크릴아미드 겔에서 DNA를 정제하기 위한 프로토콜이 제공됩니다.

QIAEX II system으로 정제된 DNA는 다음을 포함한 대부분의 응용 분야에서 바로 사용할 수 있습니다.

• 제한효소 처리(Restriction digestion)
• 라벨링
• 라이게이션(Ligation)
• PCR