QuantiTect PCR Kit

• 高度灵敏的低拷贝靶标检测
• 使用序列特异性探针或 SYBR Green 的 qPCR
• 对跨越多个数量级的模板进行精确定量
• 无需优化反应和循环反应条件
• 在一管反应中检测多达 5 个靶标

QuantiTect PCR Kit（qPCR 试剂盒）可使用序列特异性探针或 SYBR Green I 检测，通过 Real-time PCR 和两步法 RT-PCR 对 gDNA 和 cDNA 靶标进行灵敏定量。这些 Real-time PCR 试剂盒还能通过多重 Real-time PCR 或两步法 RT-PCR，在一管反应中可靠地定量多达 5 个 gDNA 或 cDNA 靶标。即用型预混液中热启动和独特 PCR 缓冲液系统相结合，可确保在任何实时定量 PCR 仪上无需优化便可进行高灵敏度的 qPCR。dNTP 混合物包括 dUTP，可选择用 UNG 处理。为方便起见，QuantiTect PCR Kit 中的预混液可存放在 2–8°C 环境下。

有两种试剂盒形式可用于使用序列特异性探针的多重 PCR：适用于需要 ROX 染料进行荧光归一化处理的定量 PCR 仪的 QuantiTect Multiplex PCR Kit；适用于所有其他定量 PCR 仪的 QuantiTect Multiplex PCR NoROX Kit。

与其他聚合酶相比，QuantiTect 定量 PCR 试剂盒中包括的 HotStarTaq DNA Polymerase 能提供最严格的热启动，从而提高 PCR 反应的特异性。

QuantiTect SYBR Green PCR Kit 可在宽线性范围内进行特异性定量（请参阅图“ 宽线性范围内的特异性定量”）。与 QuantiTect Reverse Transcription Kit 和 QuantiTect Primer Assay 结合使用时，QuantiTect SYBR Green PCR Kit 可提供灵敏可靠的结果（请参阅图“ 具有特异性且灵敏的定量”）。

QuantiTect Probe PCR Kit 与 QuantiTect Reverse Transcription Kit 结合使用，可获得灵敏可靠的结果（请参阅图“ 灵敏度和效率高，动态范围广”）。独特的 PCR 缓冲液成分使 QuantiTect Probe RT-PCR Kit 能对低拷贝 DNA 靶标进行灵敏定量，并能在宽线性范围内准确定量（请参阅图“ Real-time PCR 动态范围广”）。

QuantiTect Multiplex PCR Master Mix 可确保多重反应中 PCR 产物的扩增效率和灵敏度与相应单重扩增反应中的 PCR 产物相同（请参阅表“三重和单重 PCR” 的阈值循环 (C_Τ) 值相当和图 “ 4 重和单重 PCR 的结果相当”）。

即使同一反应中参考基因的拷贝数多达 10⁶ 倍，这些试剂盒也能检测到低至 10 个拷贝的靶标基因（请参阅图“ 在存在过量参考基因的情况下检测 10 个拷贝的靶标基因和相应的表格“高低丰度靶标的成功定量三重 qPCR”）。

QuantiTect SYBR Green PCR Kit 含有经过优化的即用型预混液，可使用 SYBR Green I 对 cDNA 靶标进行高特异性和灵敏度的实时定量（请参阅表 “2x QuantiTect SYBR Green PCR Kit 的组分”）。预混液中的荧光染料 SYBR Green I 可用于分析多种靶标，而无需合成靶标特异性标记探针。PCR 缓冲液中 K⁺ 和 NH₄⁺ 离子的平衡组合可促进特异性引物退火，实现高 PCR 特异性和灵敏度（请参阅图“特异性引物退火”）。此外，HotStarTaq DNA Polymerase 可提供严格的热启动，防止形成非特异性产物。

QuantiTect Probe PCR Kit 含有经过优化的即用型预混液，可使用序列特异性探针对 gDNA 和 cDNA 靶标进行高特异性和灵敏度的实时定量（请参阅表 “2x QuantiTect Probe PCR Kit 的组分”）。这些试剂盒设计用于所有类型的序列特异性探针，包括水解探针检测（例如 TaqMan® 和其他双标记探针）、FRET 探针及分子信标。QuantiTect Probe PCR Kit 含有独特的 PCR 缓冲液，其中包含 K⁺ 和 NH₄⁺ 离子的平衡组合，可促进特异性引物退火，从而实现高 PCR 特异性和灵敏度（请参阅图“特异性引物退火”）。此外，HotStarTaq DNA Polymerase 可提供严格的热启动，防止形成非特异性产物。

QuantiTect Multiplex PCR Kit 使多重、两步法 RT-PCR 首次尝试就能成功（请参阅流程图“ QIAGEN 多重试剂盒”）。经优化的预混液可确保多重反应中 PCR 产物的扩增效率和灵敏度与相应单重扩增反应中的 PCR 产物相同。使用该试剂盒可检测到低至 10 个拷贝的靶标基因。

在同一而非独立反应中扩增对照和靶标基因可尽量减少操作错误，从而提高基因定量的可靠性。QuantiTect Multiplex PCR Master Mix 包含 K⁺ 和 NH₄⁺ 离子的平衡组合以及独特的 Synthetic Factor MP，它们能共同促进引物和探针稳定且高效地退火到核酸模板，从而提高 PCR 的效率（请参阅表“2x QuantiTect Multiplex PCR Kit 的组分”）。此外，HotStarTaq DNA Polymerase 可提供严格的热启动，防止形成非特异性产物。

QuantiTect PCR Kit 中的预混液还含有 dUTP，可在开始 PCR 之前用尿嘧啶-N-糖基化酶 (Uracil-N-Glycosylase, UNG) 进行预处理，确保任何具有污染性的 PCR 产物都不会影响后续的 PCR 反应。

如有需要，可用尿嘧啶-N-糖基化酶 (Uracil-N-Glycosylase, UNG) 对反应进行预处理，以消除先前反应中 PCR 产物的残留污染。为获得最佳的实时两步法 RT-PCR 结果，我们建议使用 QuantiTect Reverse Transcription Kit 合成 cDNA。该试剂盒能在短短 20 分钟内快速合成 cDNA，并集成了去除基因组 DNA 污染功能。

QuantiTect SYBR Green 和 Probe PCR Kit 无需进行可能既繁琐又耗时的反应条件优化。只需在即用型 PCR 预混液中加入引物和 DNA 模板，便可启动反应。按照手册中的方案，在任何实时定量 PCR 仪上获得快速可靠的结果。

将 QuantiTect SYBR Green PCR Kit 与 QuantiTect Primer Assay 结合使用，可确保获得高特异性的基因表达分析结果。这些引物是经过生物信息验证的全基因组引物集，可用于检测人、小鼠、大鼠和许多其他物种的转录物。您可以通过 GeneGlobe 方便地在线订购 QuantiTect Primer Assay。

QuantiTect Multiplex PCR Kit 包含即用型预混液，无需优化反应和循环条件。该手册包含一个可用于所有实时定量 PCR 仪的单一方案，还列出了推荐使用的染料。

试剂盒提供时预混液中可包含或不含 ROX 参比荧光染料，因此几乎可在任何实时定量 PCR 仪上使用（请参阅表“选择合适的 QuantiTect Multiplex PCR Kit”）。由于 ROX 浓度经过优化，即使是低拷贝数也能通过自动数据分析检测出来。

QuantiTect PCR Kit 可用于在任何实时定量 PCR 仪上进行 cDNA 基因表达分析或 gDNA 定量。这包括来自 Applied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche 和 Agilent 的仪器。对于 Rotor-Gene Q 和其他 Rotor-Gene 定量 PCR 仪，我们建议使用 Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit、Rotor-Gene Probe PCR Kit 或 Rotor-Gene Multiplex PCR Kit，它们是专为在这些仪器上进行快速循环反应而开发的。